Base Estructural Para Las Funciones De Tetraspaninas Revelada Por La Estructura Cryo-Me De Complejos De Uroplaquinas A Resolución De 6-A°

Base estructural para las funciones de Tetraspaninas
revelada por la estructura Cryo-ME de complejos de
Uroplaquinas a resolución de 6-A°
Guangwei Min, Huaibin Wang, Tung-Tiendom y Xiang Peng-Kong

The Journal of Cell Biology 2006, Junio 173 No. 6, 975–983

Structural basis for tetraspanin function as
revealed by the cryo-EM structure of uroplakin
complexes at 6-A° resolution
GuangweiMin 1 , Huaibin Wang 1 , Tung-Tiendom 2 , 3 , 4 , 5 , y Xiang PengKong 1

GRUPO 17 – PAPER 7

INTRODUCCIÓN

FIGURA 1: La Tetraspanina se compone de 4 dominios transmembrana (TM; cilindros de color verde) que
contienen residuos conservados. TM1 y TM2 el costado SEL, y TM3 y TM4 el costado LEL. Las Tetraspaninas
contienen varios residuos de aminoácidos conservados. Aquí se muestra el motivoCCG conservado en el LEL, que
forma puentes disulfuro (líneas negras) con otras cisteínas conservadas (círculos de color dorado). El ejemplo que se
muestra es el de CD81 LEL, cuya estructura 3-D ha sido resuelta y que contiene 2 puentes disulfuro. El número de puentes
disulfuro varía de 2 a 4 entre miembros de la familia. La CD81 LEL no contiene sitios de glicosilación potenciales, adiferencia de la mayoría de los Tetraspaninas. Se destaca aquí las cisteínas conservadas, que son sitios potenciales
palmitoilación en los terminales amino y carboxilo y el bucle interior de la porción intracelular de las moléculas.
Levy S , Shoham T, Physiology 2005;20:218-224 (1)
©2005 by American Physiological Society

INTRODUCCIÓN
 Las Uroplaquinas son de la superfamilia de las Tetraspaninas,pero están
limitadas al tejido urotelial. Las Uroplaquinas Ia y Ib forman una red cristalina (2-D)
de paneles hexagonales de 16nm, cubriendo casi toda la superficie urotelial. (2)
 La falta de información acerca de las hélices transmembrana y cómo éstas se
conectan con los bucles extracelulares, ha limitado la compresión de la
estructura-función de las tetraspaninas y la formación de la red. El complejo formado por las Uroplaquinas parece ser adecuado para el estudio
de esta red. (3)
 La observación 3-D de este complejo de Uroplaquinas tendrá implicación en la
formación de la red de tetraspaninas en general. (4)

MATERIALES Y MÉTODOS
 Preparación y examen de las placas uroteliales en ME de ratón: Placas
uroteliales de ratón se aislaron por gradiente de densidad desacarosa y se
lavaron con detergente diferencial. (5)
 Registro y procesamiento de imagen: Micrografías electrónicas tomadas con
aumento de 50.000 en dosis baja, las imágenes elegidas se digitalizaron mediante
un escáner a un tamaño de 14 μm.
 Densidad de la segmentación y la construcción de modelos: La segmentación
del mapa de densidad de la partícula 16 nm se realizó utilizando AMIRA. Seacoplaron el modelo poli-alanina de EC1 y EC2 manualmente en el mapa de
densidad de electrones.

RESULTADOS
FIGURA 2: La estructura 3D del
complejo UP tetraspanina de
ratón a 6 A° de resolución. (A)
La vista desde arriba de la
partícula hexagonal de 16nm
consta de seis subunidades (uno
de ellos se describe en azul) que
rodean un área central de ~ 6nm
de diámetro lleno de lípidos.
Cadasubunidad a la vez, se
compone de un subdominio
interior (punta de flecha) y un
subdominio exterior (flecha). (B)
La partícula UP tiene una forma
cilíndrica y una altura de ~
12,5nm. La dimensión vertical de
la partícula puede ser dividida en
cuatro zonas: desde la parte
superior ; JT ~3nm de altura, el
tronco; CT ~5nm, el TM; ~4nm
de altura, y el citoplasma
dominio TC. (6)

 Unavista superior del mapa 3D mostró una forma hexagonal estrellada,
con seis subunidades
 Una vista lateral del mapa 3D muestra que la partícula tiene una forma
cilíndrica

RESULTADOS

FIGURA 3: El TM del par superior primario de
tetraspanina como un haz de cinco hélicesTM. (A) Las hélices transmembrana del par de
tetraspanina
Ia/II vistas desde el lado
citoplasmático. La densidad...