Betalaínas

Determinación del contenido de betalaínas por espectrofotometría.

Procedimiento
Betalaínas en la Pulpa de tuna: se diluyó la pulpa en relación 1:1 en agua destilada(v/v); se tomó 10 mL de esta solución diluida y se sometió a distintos sistemas de extracción (temperatura y tiempo).
Sistemas de extracción
- Tº ambiente: 10, 20, 30 y40 min.
- 40 ºC: 10, 20, 30 y 40 min.
- 50 ºC: 10, 20, 30 y 40 min.
- 60 ºC: 10, 20, 30 y 40 min.
- 70 ºC: 10, 20, 30 y 40 min.

Se centrifugó a 3000rpm x 10 minutos a 20 ºC (centrífuga Hettich, modelo Universal 320 R) y se filtró empleando membranas de 0,45 µm de poro. Luego, del filtrado se tomó 1 ml de muestra y seaforó a 10 ml con buffer McIlvaine pH 6,5, de manera de poder leer en un espectrofotómetro a longitudes de onda de 480nm, 538 nm y 600 nm, respectivamente.
Los análisisrealizados a la pulpa de tuna se hicieron por triplicado.

Fórmula utilizada

B = A * FD * PM * V * 1000
ε * L * P
Donde:
B = contenido de betalaínas (mg/g)expresado como betanina o indicaxantina.
A = diferencia de absorbancia entre la muestra y su respectivo factor de corrección a 600 nm.
FD = factor de dilución.
PM = pesomolecular: betaninas 550 g/mol e indicaxantinas 308 g/mol.
V = volumen inicial al que es llevado la muestra.
ε = coeficiente de extinción molar: betaninas 60000 L/mol*cm eindicaxantinas 48000 L/mol*cm.
L = distancia que recorre la luz en la cubeta (1 cm).
P = peso de la muestra (g).


Preparación buffer McIlvaine pH 6,5:

solution A = 0.1MAcido Cítrico (C6H8O7.1H2O) = 21.01g Ac. cítrico /litro
solution B = 0.2M Disodium hydrogen phosphate (Na2HPO4.2H2O) = 35.60g /litro
• pH 6.5 = 29.65ml A + 70.35ml B