bilirrubina







DETERMINACION DE BILIRRUBINA

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
El alumno aplicara metodología colorimétrica para la determinación de bilirrubina directa y total en suero y otros líquidos biológicos

INTRODUCCIÓN:
SIGNIFICACION CLINICA
La bilirrubina, compuesto de degradación de la hemoglobina, es captada por el hígado para su conjugación y excreción en la bilis. Las alteracioneshepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar hiperbilirrubinemias. La eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recién nacidoes una patología provocada por incompatibilidad materno-fetal en la que se produce una destrucción excesiva de glóbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la bilirrubina sérica con el consecuente riesgo de difusión del pigmento al sistema nerviosocentral, por lo que la determinación de la bilirrubina en estos niños recién nacidos resulta sumamente importante.
La bilirrubina es un producto derivado del metabolismo de la hemoglobina. Los hematíes al degradarse liberan la hemoglobina que es metabolizada a dos moléculas el grupo heme y el grupo globina, el grupo heme se transforma en biliverdina y esta en bilirrubina a la cual se le llama "noconjugada" o indirecta. Al pasar por el hígado esta bilirrubina se conjuga con ácido glucurónido transformándose en bilirrubina "conjugada" o directa.
El hígado segrega esta bilirrubina directa a través de las vías biliares hacia el intestino, al metabolizarse por la flora intestinal se convierte en urobilinas que dan el color marrón a las heces. Parte de estas urobilinas se reabsorben y puedenaparecer en la orina en forma de urobilinógeno.
Cuando se eleva la bilirrubina, la piel y los tejidos toman un color amarillo que se llama ictericia. Según cual sea el origen de la bilirrubina elevada podemos saber si es un problema de hígado (elevación de la bilirrubina no conjugada) o de las vías biliares (elevación de la bilirrubina conjugada).
Cuando se realiza un análisis de rutina se midela bilirrubina total (directa más indirecta), el 70 al 85 % corresponde a la bilirrubina no conjugada o indirecta.
¿Para qué se realiza este estudio?
Se realiza en el contexto de otras pruebas hepáticas (GOT, GPT, GGT, fosfatasa alcalina) y se utiliza para evaluar problemas o alteraciones del hígado y vías biliares.
En los pacientes con ictericia se mide la bilirrubina total la directa y la indirecta.Cuando la fracción conjugada o directa está elevada, más de un 50% de la bilirrubina total, es que hay un problema en la vía biliar por cálculos, inflamación o tumores.
Cuando la bilirrubina directa o conjugada es menor del 20%, la hipebilirubinemia es del tipo indirecto o no conjugada y puede ser debido a hepatitis ó a un aumento de destrucción de hematíes (hemólisis).

FUNDAMENTO:
Labilirrubina reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado produciendo un pigmento color rojo-violáceo (azobilirrubina) que se mide fotocolorimétricamente a 530 nm.
Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el diazorreactivo, la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presencia de un desarrollador acuoso (Reactivo A) que posibilite su reacción. Deforma tal que, para que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presente en la muestra, debe agregarse benzoato de cafeína al medio de
Reacción.

MATERIAL A UTILIZAR:
CANTIDAD
DESCRIPCIÓN
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Material para extracción sanguínea
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Tubos de ensaye de 13 X 100 ml
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Micro pipeta
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Puntas para micro pipetas
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Gradillas para tubo de ensaye
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Cubetasespectofotometricas
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Frasco de vidrio color caramelo

EQUIPO A UTILIZAR:
CANTIDAD
DESCRIPCIÓN
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Centrifuga
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Espectofotometro
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Reloj o cronometro

REACTIVOS A UTILIZAR:
CANTIDAD
DESCRIPCIÓN
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Reactivo 1
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Reactivo 2
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Reactivo 3
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Reactivo 4
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Cloruro de sodio

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO:
Componentes Concentración Inicial de las Soluciones
1. Acido...