Bio Seguridad En Laboratorios

PRACTICA 2.- AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DE IMPORTANCIA INDUSTRIAL



Objetivo: Al terminar la práctica el estudiante será competente para proponer métodos para el aislamiento de microorganismos de interés en la industria.

Introducción: Los microorganismos utilizados en los procesos industriales proceden de diferentes fuentes y son muy variados en sus actividades, los hay de utilidad enla industria de los alimentos: modificación y alimento en sí mismo; producción de bebidas: cerveza y vino entre otras; producción de sustancias químicas: ácidos orgánicos; producción de bioinsecticidas, etc.
Los microorganismos pueden aislarse de la naturaleza y posteriormente ser purificados utilizando técnicas de enriquecimiento o medios selectivos.
Las diversas necesidades de losmicroorganismos nos impiden el aislarlos con un solo medio o método de aislamiento por lo que será necesario el manejo de las condiciones que favorecen su desarrollo: pH, temperatura, necesidades gaseosas, etc.
Para el aislamiento de cualquier tipo de microorganismo debe tenerse en cuentas:
1. Tipo de microorganismo
2. Tipo de muestra que se va a utilizar3. Tipo de sustrato natural
4. Técnica de aislamiento que se va a utilizar.
5.
En particular resulta muy importante tener conocimiento del proceso de aislamiento de levaduras que producen alcohol (Levaduras alcohogenas). Una manera sencilla de realizar un aislamiento de este tipo de microorganismos consiste en realizar un raspado con un asa bacteriológica, de lacolonia que se desea aislar, tratando de que este procedimiento se realice de las colonias más alejadas, posteriormente se realizan diluciones en tubos de ensayo que pueden contener mosto de frutas que realizan fermentación como la uva o la piña. Después de su incubación (a 27 C durante 48 horas) y desarrollo se siembran en tubos con agar (de Malta) inclinado para su taxonomía y posteriorconservación.
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Imagen 1.- Esquema del procedimiento de aislamiento de levaduras.


Material:
• 3 pipetas de 1 mL estériles
• 5 tubos con rosca con campana Durham
• Etanol potable
• 5 cajas Petri desechables con medio YMA
• 2 Matraces de 1 litro
• 1 asa bacteriológica
• 1 Mechero Fisher
• Extracto de levadura
• Extracto de malta
• Glucosa
•Peptona
• Agar
• Agua destilada










Procedimiento:
Aislamiento de levaduras alcohógenas


1. Se tomó una fruta fermentada (piña).
2. Con una pipeta estéril se inoculo con un mL tres tubos de YMB + 3% de etanol a pH 4.5.
3. Incubo a temperatura ambiente por 48 horas obteniendo una temperatura de 36 C.
4. Observa la producción de gas entodos los tubos.
5. Se realizaron tinciones simples dejando la muestra fija en azul de metileno durante tres minutos y se procedió a su observación (resultados 1).
6. Se tomó una muestra de los tubos y se espatuló 0.1 en cajas de YMA para poder tener colonias puras.


7. Ya que había colonias puras, se seleccionaros 4, dos que parecían crecer como un hongo y dos bacterianas (resultados1).
8. De cada colonia se inoculo un tubo YMB+ 5% de etanol y se espatulo con la técnica de aislamiento una caja YMA.
9. Se realizaron tinciones simples dejando la muestra fija en azul de metileno durante tres minutos y se procedió a su observación (resultados 2).
10. 48hrs despues los tubos que fueron inoculados con las bacterias, no presentaron producción de gas, por lo que fuerondescartadas para la resiembra en caja.
11. Los tubos con presencia de gas fueron dos que tenían las colonias tipo hongo.
12. Se hicieron nuevas cajas Petri YMA y tubos YMB para encontrar bacterias alcohogenas.
13. De momento se usaran las colonias que fueron totalmente aisladas en la caja Petri YMA que es una levadura.


Medio YMA


Extracto de levadura 3 g
Extracto de...