Biobalistica

Biobalística o Microproyectiles
En este procedimiento el ADN es introducido en las células por medio de partículas microscópicas (micropartículas) aceleradas a velocidades supersónicas, queatraviesan la pared y la membrana celular. Las partículas son aproximadamente esféricas (de 0.4 a 2.0 micrómetros de diámetro), están hechas de materiales densos como oro o tungsteno (ver microfotografía 1 y2, respectivamente), y se recubren con el ADN que se desea transferir a las plantas. Para que las micropartículas puedan atravesar las membranas celulares y llegar al núcleo de las células blanco, sonimpulsadas a gran velocidad por explosión de pólvora seca, liberación de gas comprimido a alta presión (aire, helio, CO2 o N2), o por una descarga eléctrica de una gota de agua. Una vez dentro deltejido vegetal el ADN se desprende de las micropartículas debido a las modificaciones del entorno iónico.
Si las partículas atraviesan las membranas y son atrapadas en el núcleo, el ADN puedeintegrarse de forma estable en los cromosomas mediante un proceso de recombinación al azar, lo que se considera como transformación estable. La transformación estable ocurre a muy baja frecuencia, por lo quees necesario utilizar un sistema de selección in vitro (ver cuadernos Nº 5, 18 y 67) que permita distinguir células transformadas y no transformadas.

En este método de transformación lasconstrucciones genéticas son más simples e incluyen los genes de interés y de selección con sus secuencias regulatorias respectivas. El ADN para ser clonado es incluido en plásmidos que son transferidoscompletos durante el bombardeo a las células, o bien de forma de molécula lineal (el plásmido cortado en un punto), a diferencia de los plásmidos utilizados con Agrobacterium (plásmido ti desarmado). Tambiénes muy común que una vez obtenida la construcción genética dentro de un plásmido (en el cual se clona y se obtienen muchas copias para trabajar), luego se la extrae del mismo para sólo tener la...