Biocatalisis Enzimatica

BIOCATALISIS ENZIMATICA
I. RESUMEN:

En la presente práctica se llevó a cabo la extracción y ensayo de la actividad invertasa de levadura de panadería (-D-fructofuranosidasa), utilizando como material de partida un preparado de levadura fresca comercializado por la casa Fleishman. Se determinó que en los preparados enzimáticos en bruto para una dilución 1:1 ,una actividad enzimática de2.2805ul/ml en 0.1 ml; para la dilución 1:2, una actividad enzimática de 1.44 ul/ml en 0.05ml; para la dilución 1:3 una actividad enzimática de 0.8387 ul/ml en 0.033 y en la dilución 1:4 se obtuvo 0.5315ul/ml en 0.025ml.
Además, para el análisis de proteínas de los extractos de invertasa, al objeto de determinar la actividad específica de éstos, se obtuvo asimismo una curva de calibrado de BSAmediante la aplicación del método colorimétrico de Bradford; se determinó la concentración del extracto bruto de enzima dando como resultado 0.7703g/l, teniendo como actividad específica de la enzima invertasa : 2.9604 UI/mg.
La velocidad de reacción se determinó analizando la cantidad de azúcares reductores (medida por método DNS) formados (D-glucosa + D-fructosa, expresadas como equivalentesde glucosa) producida por unidad de tiempo y la actividad enzimática se expresará como actividad específica.
Los parámetros cinéticos se determinaron a través de las mediciones de las velocidades iniciales de la reacción a diferentes concentraciones, la manera más adecuada es por linealización de las ecuaciones cinéticas; en la experiencia se determinó los parámetros cinéticos de la enzima porel método de los inversos (1/s vs 1/v), dando como resultado Kap = 0.31gr/L y Vap=4.6185gr/L*min.
En conclusión, el presente trabajo tuvo como finalidad determinar las condiciones de operación para la hidrólisis de sacarosa en lote por la enzima inmovilizada en un reactor, cuantificando la cantidad de azúcares reductores liberados, la velocidad inicial de hidrólisis y la hidrólisis a diferentesconcentraciones de sustrato y a una temperatura de 45°C. El pH fue de 4.7 regulados con buffer acetato.
II. INTRODUCCIÓN:
Como todos los catalizadores, las enzimas disminuyen la energía requerida para conseguir una reacción comenzada. Debajo se demuestra un diagrama similar con más detalle para el patrón de la energía para la reacción catalizada enzima. Primero, la energía se requierepara formar el complejo entre la enzima y el substrato (complejo del E-S) que es un estado de una energía más alta que la enzima y el substrato/el producto libres.

Figura 01. Diagrama de la energética de la enzima catalizó la reacción contra la reacción no-catalizada.
La funcionabilidad biológica de las enzimas depende de la mantención de su estructura biológica de las enzimas depende lamantención de su estructura proteica nativa que es consecuencia directa de la información genética contenida en el ADN.
Su capacidad catalítica reside en su centro activo, que es una estructura formada por un número reducido de grupos funcionales (residuos aninoacidicos) que poseen una alta afinidad por el sustrato, con la cual se combina específicamente dando origen a la reacción:

De forma general,la velocidad de una reacción catalizada enzimáticamente es proporcional a la cantidad de enzima en la mezcla de ensayo, según:

v = Vmax[S]/(Km + [S]) = k'[E0] Vmax = kcat [E0]

v = Vmax[S]/(Km + [S]) = k'[E0] Vmax = kcat [E0]

Las enzimas pueden requerir, además de su estructura proteica de otras moléculas esenciales para su actividad denominada cofactores, existiendo cofactores ligados ocatalíticos y cofactores disociables o estequiometricos.
Desde el punto de vista de su utilización tecnológica, las enzimas son catalizadoras del proceso de transformación de materias primas en producto útiles.
El carácter catalico de la enzima permite en teoría su indefinido en la conversión de sustratos en productos.
En los últimos años, la biotecnología ha experimentado grandes avances...