Biocelfaccionamientocelular

INTRODUCCIÓN.
El fraccionamiento celular es usado para investigar la bioquímica y fisiología de organelos fuera del ambiente complejo de la célula intacta. El objetivo principal de esteexperimento es aislar los cloroplastos, núcleo y mitocondria del tejido de plantas por el método de fraccionamiento celular. Los otros objetivos son examinar esas fracciones microscópicamente y estimar elcoeficiente de sedimentación de los cloroplastos.
HOMOGENIZACIÓN
Para preparar los tejidos para el fraccionamiento celular, primero se debe suspender en un medio apropiado(una soluciónamortiguadora, salina ó azúcar isotónica). Para mantener la integridad de los organelos y enzimas durante el procedimiento de la fraccionación , todas las soluciones y cristalería debe mantenerse frías.Después de rebanar las hojas, el tejido está preparado para la homogenización, procedimiento que rompe los enlaces celulares y libera el contenido celular, sin dañar el medio en suspensión. Lasuspensión de células constituyentes se llama homogenado. Para los tejidos de plantas, la homogenización se debe realizar con un mortero, al cual se le añade arena como abrasivo.
CENTRIFUGACIONDebido a las diferencias en tamaño y densidad, cada componente celular está sujeto a una fuerza centrífuga. La fuerza generada por la centrífuga se expresa como fuerza centrífugarelativa(RCF)en unidadesde g. La RCF es una función de velocidad de centrifugación en revoluciones por minutos (rpm) y la distancia de partículas desde el eje de rotación. Conociendo esta distancia (x) y el (rpm), se puededeterminar el RCF de la ecuación : RCF = 1.19 x 10-5 (rpm)2x, donde x se toma como la distancia (en cm) desde el eje de rotación hasta el margen de afuera del tubo de centrífuga.
CENTRIFUGACIONDIFERENCIAL
En la centrifugación diferencial, el homogenado es centrifugado repetidas veces a altas velocidades ,sedimentándolo progresivamente en pequeñas partículas. La primera...