Bioensayo Tiempo De Retención Del Rojo Neutro

“Bioensayo tiempo de retención del rojo neutro
(Eisenia fetida).”



























INTRODUCCIÓN

Los organismos vivos integran el efecto tóxico causado por la exposición a diferentes xenobióticos o contaminantes, y responden de manera integral en sus diferentes niveles de organización (subcelular, celular, tejidos, órganos y sistemas) al efectoadverso de compuestos o mezclas de ellos. Los bioensayos proveen una medida más directa de la toxicidad ambiental relevante en los sitios contaminados que los análisis químicos, ya que integran la respuesta de los factores ambientales y de los compuestos tóxicos.
La citotoxicidad de los compuestos puede ser determinada a través de pruebas cuyo fundamento es la absorción de colorantessupra vitales, como es el caso de la aplicación de la prueba de citotoxicidad con rojo neutro. Las pruebas de citotoxicidad con este colorante supravital y modelo biológico han sido utilizadas ampliamente en la evaluación de diversas sustancias, como los plaguicidas y metales pesados. Este ensayo se basa en la detección de los daños que producen los compuestos tóxicos sobre la integridad de lamembrana de los lisosomas en las células y sobre el control del flujo del colorante a través de la misma. La acumulación del rojo neutro ocurre por entrampamiento de la forma protonada del colorante dentro del ambiente ácido del lisosoma o por unión del rojo neutro a cargas ácidas fijas, tales como polisacáridos ácidos dentro de la matriz del lisosoma. Como respuesta se observa una disminución en lacapacidad de las células para asimilas y retener al colorante rojo neutro en el interior de los lisosomas, la cual es indicadora de la viabilidad celular (Uribe, R.).

OBJETIVOS

Objetivo general:
▪ Determinar el tiempo de retención rojo neutro, mediante la estabilidad de la membrana lisosomal del bioindicador Eisenia fetida expuesto a concentraciones de contaminantes.

Objetivosespecíficos:
▪ Desarrollar la técnica de extracción de liquido celomico del bioindicador Eisenia fetida.
▪ Desarrollar mediante la visualización practica la identificación de los componentes del líquido celomico. (celomocitos-eliocitos).
▪ Determinar el efecto de la concentración de un contaminante, en la estabilidad de la membrana lisosomal en el bioindicador Eisenia fetida.MATERIALES Y METODOS
Materiales:
▪ Lombrices de tierra adultas de la especie Eisenia fetida (peso individual: 300 mg).
▪ 3 Placas Petri 100 mm de diámetro, 3 Papel filtro 90 mm de diámetro
▪ 1 pipeta 0.1 mL, 3 Jeringas 1 mL.
▪ Recipiente de vidrio.
▪ 3 Porta objeto y cubre objeto
▪ Guantes
▪ Microscopio óptico
▪ Cámara húmeda
▪ Soluciones: SoluciónRinger, solución Rojo Neutro, solución stock CuCl2(500mg/l)

Procedimiento:
1. Se rotularon las placas Petri con el número de réplica y dilución correspondiente.


Preparación de solución stock del tóxico y diluciones:


.- Se preparó una solución stock del contaminante a una concentración de 500 mg/l de la siguiente manera:
.- Se pesó en la balanza analítica 0.0500 gr de CuCl2 y setraspasó a matraz aforado de 100 ml con agua destilada.
.- Luego en 3 matraces se dispuso el volumen extraído requerido para obtener la dilución correspondiente, y posteriormente aforar hasta 100 ml con agua destilada. En la siguiente tabla se muestra los volúmenes y concentraciones para el ensayo:



|Disolución |Volumen extraído de solución stock (ml)|Concentración de la dilución (mg/L) |
|30% |6 |30 |
|10% |2 |10 |
|5% |1 |5...