Bioensayos en Fisiología Vegetal

MÉTODO DE CRECIMIENTO RECTO
DE COLEÓPTILOS DE TRIGO

Basado en las investigaciones de F. Wightman;
Variaciones de C. R. Hancock, H. W. B. Barlow y
H. J. Lacey; G. F. Pegg: J. van Overbeek y L.
Dowding.

Descripción del método. Los efectos de compuestos sobre la elongación celular se miden haciendo flotar segmentos de coleóptilos de trigo en soluciones acuosas del producto químico ycomparando su longitud con la de segmentos que floten en agua destilada.
Aparatos, productos químicos y otros materiales

1. Papel filtro Whatman núm. 3, de 10 cm de diámetro.
2. Platos de Petri de 10 cm de diámetro.
3. Espacio en la mesa de un local con la temperatura controlada de 24° a 26° C.
4. Cajas de humedad constante con cubiertas de vidrio.
5. Filtro de luz Kodak Ruby Signal o lámparaincandescente roja (50 w).
6. Hojas de afeitar e instrumento de corte (véase Cortadoras de segmentos, pág. 125).
7. Pequeños fórceps o brocha.
8. Aguja.
9. Balanza analítica.
10. 50 a 100 mg de cada compuesto que deba evaluarse.
11. 50 a 100 mg de 2,4-diclorofenoxiacetato de sodio, para tratamiento estándar.
12. Agua destilada en vidrio.

Material vegetal recomendado. Germinación desemillas de trigo (Triticum aestivum L., llamado también T. sativum Lam., y T. vulgare Vill.), variedad Eclipse. También pueden utilizarse para esta prueba otras variedades de trigo.

Preparación y selección del material vegetal.
Remójense semillas de trigo en agua destilada durante 2 horas y luego pónganse con los embriones hacia arriba sobre papel filtro húmedo, en platos de Petri (30 a 40 semillaspor plato).
Déjese que germinen durante unas 66 horas, de 24° a 26° C.
Manténgase una atmósfera húmeda (80 a 90%) en tomo a las semillas, colocando los platos de Petri en una caja de humedad constante (fig. 15).
Pónganse los platos descubiertos sobre un anaquel metálico perforado, que repose sobre los bordes superiores de una bandeja metálica que contenga agua, al fondo de la caja.Durante las primeras 50 horas del crecimiento, expónganse las semillas a la luz de una lámpara incandescente roja o a la luz que pase por un filtro de rubí.
La luz roja deberá estar a unos 60 cm de las semillas.
Déjese que el crecimiento subsecuente de las plantas se lleve a cabo en la oscuridad. Aproximadamente 66 horas después de poner las semillas en el papel filtro mojado, selecciónense plantascon coleóptilos de 17 a 20 mm de longitud.
Luego, con la ayuda del instrumento de corte, tómese un segmento de 10 mm de longitud de la parte media superior de cada coleóptilo.
Utilícese la cortadora de segmentos de modo que el segmento apical de 3 mm de cada coleóptilo se retire y quede en el instrumento, mientras que el segmento siguiente de 10 mm sea cortado por las hojas de afeitar, paraformar el segmento de prueba.
Retírese la hoja primaria haciendo pasar los segmentos sobre capilares finos de vidrio, 2 segmentos por capilar y luego, dejando que dichos segmentos flotenen agua destilada en un plato de Petri, hasta que se requieran para el experimento.
Este periodo de pretratamiento no deberá sobrepasar 3 horas. En otros métodos se mide el segmento de 15 mm que se utiliza parala prueba, comenzando a 2 mm de distancia de la punta.
El segmento de la punta se retira también para eliminar, hasta donde sea posible, los efectos de la auxina endógena.

Procedimiento.
Prepárense soluciones que representen una serie de diluciones del compuesto que vaya a probarse diluyendo una solución normal concentrada del compuesto con agua destilada; las concentraciones recomendadasson 0.01, 0.1, 1, 10 y 100 ppm.
Pónganse unos 20 ml de cada concentración en platos de Petri separados y háganse flotar 10 segmentos de coleóptilos en la superficie del líquido en cada plato.
Déjese que los segmentos crezcan durante 24 horas en la oscuridad de 24° a 26° C.
Háganse flotar segmentos adicionales en agua destilada y utilícense como testigos.


Método para obtener los...