BIOK 20Med 20Practica 20 2


UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CD. JUAREZ

INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMEDICAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BASICAS
BIOQUIMICA MEDICA

PRACTICA #2
CARACTERIZACION DEL ADN:
DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE ADN POR LA
TÉCNICA DE LA DIFENILAMINA EN BASE A SU CONTENIDO EN
DESOXIRRIBOSA.










Solo quiero leer un articulo de juego y subo una práctica al azar
no creo que te sea de ayuda
Sorry :C





OBJETIVOGENERAL:
Cuantificar ADN por el contenido de desoxirribosa por medio de la técnica de
difenilamina.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
Aprender a elaborar e interpretar una curva de calibración
Determinar y cuantificar la concentración de desoxirribosa presente de una
solución tipo por medio de la técnica
Comparar las concentraciones de la pentosa de la solución tipo, con la del
problema de ADNINTRODUCCIÓN:
El DNA es un polímero complejo que está organizado como una hélice doble. El
elemento fundamental es la secuencia de bases purínicas y pirimidínicas. Estas
bases están unidas a la posición C-1’ del azúcar desoxirribosa y se conservan
juntas a través del enlace de los residuos de azúcar en sus posiciones 3’, y 5’
por medio de un enlace fosfodiéster. La alternancia de los grupos fosfato ydesoxirribosa forman el esqueleto de la doble hélice. Estos enlaces 3’- 5’ definen
también la orientación de una tira dada de la molécula de ADN y puesto que las
dos tiras corren en dirección opuesta, se dice que son antiparalelas.

La estructura del ADN está compuesta por nucleótidos de purina y pirimidina,
esta estructura se va hidrolizando (rompiendo) a nucleósido de purina y
nucleósido de pirimidinamás fosfatos libres, luego se hidrolizan los nucleósidos
de purina a bases púricas y pentosas libres, las pirimidinas se quedan como
están. La difenilamina reacciona con 2 pentosas libres (desoxiribosas). En
solución ácida, la cadena lineal de una desoxipentosa se convierte en la forma
-hidroxilevulinoaldehído altamente reactiva y que reacciona con la difenilamina
para dar un complejo azul, con unaabsorción definida máxima a 595 nm. En el ADN únicamente reacciona la desoxirribosa del nucleótido de purina, así que el
valor obtenido representa la mitad del total de desoxirribosa presente.


MATERIAL:
Gradilla
Tubos de ensaye
Pipetas serológicas
Vaso de precipitado
Pinzas para tubo de ensaye
Celdas para espectrofotómetro
EQUIPO:
Espectrofotómetro





MÉTODO:
Espectrofotocolorimétrico yComparativo

PROCEDIMIENTO:
Preparar una curva de calibración de la solución tipo de desoxiribosa de acuerdo
la tabla abajo expuesta

TUBO
SOLUCION TIPO DESOXIRRIBOSA 0.001M
TCA
10%
DIFENILAMINA
ABSORVANCIA
TESTIGO
------------
2.0
3.0
CALIBRAR
1
0.1
1.9
3.0
0.062
2
0.2
1.8
3.0
0.092
3
0.4
1.6
3.0
0.225
4
0.6
1.4
3.0
0.484
5
0.8
1.2
3.0
0.519
6
1.0
1.0
3.0
0.595



Para determinar la concentración dedesoxiribosa en el total de cada tubo, se
deberá utilizar la siguiente fórmula:

C1V1=C2V2

Ejemplo para el tubo #1
(0.001 M) (0.1 ml) = C2 (5 ml)
C2 = (0.001 M) (0.1 ml) / (5 ml)
C2 = 0.00002 M
Igual para cada tubo

Colocar los tubos en baño a ebullición, estos se sacan a cambio de vire.
Enfriar a chorro de agua corriente y leer a 600 (595) nm de longitud de onda.

Nota: la absorbancia delproblema se interpola en la curva de calibración



















RESULTADOS:
1.- Elaborar la gráfica (preferentemente en papel milimétrico) de la curva tipo
para la desoxiribosa.



2.- En base a la interpolación de la muestra problema en la curva tipo de
desoxiribosa, la concentración de ADN de la muestra problema es
de:__________

DISCUSION

Al conocer la importancia de los ácidos nucleicos y sufunción, nos es de suma importancia reconocer que dichas bases nitrogenadas se encuentran ligadas a un azúcar pentosa, sea una ribosa o una desoxirribosa, el saber que cantidad de este tipo de azúcar se encuentra en el plasma podremos inferir si hay algún trastorno en el metabolismo de los acidos nucleicos y el saber interpretar un análisis de cuantificación por espectrofotocolorimetria nos...