Biología Molecular


Ejercicio 2 (Plásmidos)
Instrucciones: resolver en clase, por equipos, los siguientes problemas.
PROBLEMA 1
Se montó una reacción de ligación entre el plásmido pUC18 (ver abajo) cortado con EcoR1 yPsT1 y un fragmento de DNA de 2 kpb cortado con las mismas enzimas. Los productos de esta ligación e transformaron en E. coli y se seleccionaron en una placa que contenía ampicilina, IPTG y X-Gal.En la figura se muestra el fenotipo de algunas colonias transformantes. Considerando esta información, responda las siguientes preguntas.

a) Indique porqué las colonias tienen la coloraciónmostrada.
En las colonias blancas se insertó el gen correctamente en el caso de las azules no ocurrió modificación alguna
b) Indique en cuales de estas colonias existe muy probablemente un vector (pUC18) conel fragmento de 2 kpb clonado.
En las colonias blancas ya que se clonaron los fragmentos de DNA de interés.
Hay que destacar que la incorporación artificial del polylinker dentro del gen lacZ delplásmido consiste en una inserción que no altera la pauta de lectura del mensajero transcrito a partir del promotor lacZ y que su traducción supone la inserción de unos pocos aminoácidos en la cadenapolipeptídica correspondiente sin que ello altere la actividad β-galactosidasa del polipéptido una vez complementa con el polipéptido bacteriano. La presencia de los marcadores AmpR y lacZ en el plásmidopUC18 permite seleccionar bacterias con plásmidos recombinantes tras un experimento de clonación. Para ello, las células DH5α que han pasado por una experiencia de transformación son sembradas en unaplaca con medio de cultivo sólido (medio LB) que contiene Ampicilina y X-gal. El X-gal es un β-galactósido degradado por la β-galactosidasa. Uno de los productos de degradación del X-gal forma unprecipitado de color azul sobre las colonias bacterianas con función β-galactosidasa.
Así las cosas, la forma de discriminar entre las tres poblaciones de células bacterianas obtenidas tras un...