Biologa

Métodos microbiológicos para determinar bacterias hongos y nematodos en suelo.
Bacterias totales por dilución en placa
Introducción
La cuenta de bacterias totales de un sistema se refiere a las bacterias heterótrofas presentes en el suelo, es decir, aquellas que obtienen su fuente de carbono a partir de compuestos orgánicos. En este grupo de bacterias se puede encontrar la gran mayoría de lapoblación microbiana del ambiente. Los medios usados para la cuenta de un amplio número de bacterias en el suelo, sedimento, agua, aguas residuales o composta pueden ser complejos en su formulación (incluyendo peptona o extractos de carne o de levadura), pero relativamente escasos en su composición. Uno de los medios de cultivo recomendado para su desarrollo es el agar nutritivo o caldo nutritivo,ya que es un medio relativamente simple, rico en fuentes de carbono y/o proteínas (peptona), capaz de permitir el desarrollo de muchas bacterias heterótro fas y en corto tiempo (en menos de 3 días a 30°C) (Lorch et al., 1995; Madigan et al, 1998).
Método
Para el conteo de bacterias heterótrofas del suelo se utiliza la técnica de cuenta por dilución en placa con agar nutritivo como medio decrecimiento.
Fundamento
Este método se basa en el fundamento de la dilución en placa y en este caso el crecimiento se debe a la capacidad de los microorganismos heterótrofos de crecer bien en agar nutritivo, debido a que contiene:
Interferencias
Aunque muchos de los heterótrofos se desarrollan bien en agar nutritivo o medio rico, algunos tienen requerimientos nutricionales específicos(heterótrofos exigentes), por ejemplo, vitaminas y sustancias promotoras del crecimiento, cosubstratos, etcétera, y no existen medios que puedan proporcionar todos los nutrimentos necesarios y, por ende, permitir el crecimiento de todos los microorganismos heterótrofos.
Material y equipo
Cajas de Petri.
Agua destilada
Matraces o botellas de cultivo 1 L.
Agar nutritivo. Disolver 15 g de agar nutritivo olo que indique el envase del medio de cultivo en 1 L de agua destilada.
Espátula.
Reactivos y soluciones de la sección
Balanza analítica.

Agitador magnético.

Autoclave.

Campana de flujo laminar.

Varilla para expandir muestra.

Reactivos y medios de cultivo

Procedimiento
1) Preparar medio de cultivo con agar nutritivo en un matraz Erlenmeyer o botella de cultivo.
2) Calentarhasta disolución total.
3) Esterilizar el medio de cultivo a 15 lb, 121°C durante 15 minutos.
4) Una vez esterilizado el medio de cultivo dejarlo enfriar a 50°C aproximadamente.
5) Vaciar el medio en cajas Petri en condiciones estériles en una campana de flujo laminar.
6) Dejar enfriar y gelificar el medio.
7) Preparar la muestra de suelo y diluciones, e inocular cada caja.
8) Después de tresdías de incubación proceder al conteo de colonias.
9) Para el cálculo final de unidades formadoras de colonias (UFC) se debe considerar la dilución con que se inoculó la caja, la cantidad de inóculo (0.1 ml) y la humedad de la muestra.
Hongos totales por dilución en placa.
Introducción
Los hongos tienen hábitats muy diversos; sin embargo, la mayoría son terrestres y habitan en el suelo,desempeñando una actividad importante en la mineralización del carbono orgánico. Cuando se compara a los hongos con las bacterias, en general, estos tienen requerimientos nutricionales muy simples, pero su desarrollo es más lento, por lo que requieren mayor tiempo de incubación para su cultivo. En el aislamiento, cultivo y cuenta de la mayoría de los hongos se aprovechan ciertas característicasespeciales de ellos, como su tolerancia a pH ácido y su preferencia por medios de cultivo con gran cantidad de azúcar fácilmente degradable. Además, su resistencia a la penicilina y estreptomicina permite usar estos antibióticos, los que al ser agregados a los medios de cultivo reducen el número de bacterias contaminantes.
En la preparación de los medios de cultivo para hongos con frecuencia se...