Biologia Celular Guia
Páginas: 9 (2188 palabras)
Publicado: 21 de mayo de 2012
guia de biologia celular
IV FIJACION DE CARBONO Y PIGMENTOS FOLIARES
La energía que hace posible la vida de la mayoría de los organismos proviene directa o indirectamente de la luz del sol a través de la fotosíntesis. Este proceso consiste en la conversión biológica de la energía lumínica en energíaquímica. Esta función es realizada por cianobacterias, las algas y las plantas. En el reino vegetal la fotosíntesis se realiza en dos etapas. La primera etapa se denomina fotoquímica, esta se efectúa a nivel de las membranas tilacoidales de las granas e intergranas del cloroplasto, y consiste en la captación de unidades energéticas denominadas quanta por las clorofilas. Los centros de reacción delos fotosistemas II y I son oxidados cuando la energía electromagnética alcanza 680 y 700nm respectivamente. Esta oxidación resulta en un flujo electrónico a cadenas transportadoras que se acoplan entre ambos fotosistemas. Los electrones que fluyen son desplazados desde el agua al fotosistema II mediante el complejo de evolución de oxígeno, desde ahí hasta al fotosistema I, para finalmente serutilizados para la reducción de NADP a NADPH. Además, el flujo electrónico genera una acumulación de protones dentro del lumen de los tilacoides, ello producido por la oxidación del agua y la oxidoreducción del la Plastoquinona. Esta acumulación de H+, genera un alto potencial electroquímico, el cual es disipado a nivel de las bomba ATP sintasas del tilacoide produciendo la síntesis de ATP. Lasegunda etapa ocurre en el estroma y se denomina bioquímica, esta consiste en la fijación de CO2 en moléculas orgánicas. En esta etapa se utiliza el ATP y NADPH fotoquímico para reducir el CO2 y su resultado es la formación de gliceraldehído 3P, también denominado fosfotriosa, el azúcar más simple.
Experimento 1.- Demostración de la Reacción de Hill
La llamada reacción de Hill consiste enla liberación de O2 desde el agua. La reacción se basa en que determinadas sales del ion hierro, ferrioxalato o ferricianuro se comportan como aceptores de hidrogeno. En el caso del ferrocianuro la reacción sería:
4Fe(CN)6-3+2H2O ( O2 +4Fe(CN)6-4 + 4H+
Esta reacción permite comprobar que el agua es la fuente del oxígeno que se desprende durante el proceso de la fotosíntesis. Así loscloroplastos expuestos a la luz y en presencia de aceptores electrónicos artificiales como el 2-6,- Diclorofenol indofenol; permiten obtener una fase reducida y de una fase oxidada a partir del agua.
[pic]
azul incoloro
ESTADO OXIDADO ESTADO REDUCIDO
Procedimiento.
Utilice una suspensión de cloroplastos,obtenida mediante el siguiente método:
1.- Se pesan 50 g. de hojas de espinaca (Spinacia oleracea) y se agregue 100 ml de sacarosa 0,5M y 10ml de buffer tris 0.2M a pH 8.
2.- Se homogeniza en frío y filtra a través de una gasa doble embebida en buffer.
3.- Se toman 30ml del homogenizado y centrifuga en frío a 300g (1.700 rpm) durante 5 minuto.
4.- Se obtiene una suspensión de cloroplastos ymembranas tilacoidales.
5.- El preparado se guarda en un baño de hielo hasta su utilización.
Para evaluar la ocurrencia de la reacción de Hill proceda de la siguiente manera:
Tome tres tubos de ensayos y márquelos (1, 2 y 3 respectivamente). Forre el tubo 1 y 2 con papel de aluminio. Agregue a cada tubo 5 ml de 2-6 diclorofenol indofenol 2.5*10-4 M. A los tubos 1 y 2 adicione 1ml de lasuspensión de cloroplastos. El tercer tubo déjelo como control negativo, agregando 1 ml de agua destilada y 5ml del colorante. Coloque los tres tubos bajo una lámpara de 100W, observe de las muestras después de diez minutos. Finalmente, explique los resultados de sus observaciones.
Tabla 1. Reacción de Hill
| |Tubo 1 |Tubo 2...
IV FIJACION DE CARBONO Y PIGMENTOS FOLIARES
La energía que hace posible la vida de la mayoría de los organismos proviene directa o indirectamente de la luz del sol a través de la fotosíntesis. Este proceso consiste en la conversión biológica de la energía lumínica en energíaquímica. Esta función es realizada por cianobacterias, las algas y las plantas. En el reino vegetal la fotosíntesis se realiza en dos etapas. La primera etapa se denomina fotoquímica, esta se efectúa a nivel de las membranas tilacoidales de las granas e intergranas del cloroplasto, y consiste en la captación de unidades energéticas denominadas quanta por las clorofilas. Los centros de reacción delos fotosistemas II y I son oxidados cuando la energía electromagnética alcanza 680 y 700nm respectivamente. Esta oxidación resulta en un flujo electrónico a cadenas transportadoras que se acoplan entre ambos fotosistemas. Los electrones que fluyen son desplazados desde el agua al fotosistema II mediante el complejo de evolución de oxígeno, desde ahí hasta al fotosistema I, para finalmente serutilizados para la reducción de NADP a NADPH. Además, el flujo electrónico genera una acumulación de protones dentro del lumen de los tilacoides, ello producido por la oxidación del agua y la oxidoreducción del la Plastoquinona. Esta acumulación de H+, genera un alto potencial electroquímico, el cual es disipado a nivel de las bomba ATP sintasas del tilacoide produciendo la síntesis de ATP. Lasegunda etapa ocurre en el estroma y se denomina bioquímica, esta consiste en la fijación de CO2 en moléculas orgánicas. En esta etapa se utiliza el ATP y NADPH fotoquímico para reducir el CO2 y su resultado es la formación de gliceraldehído 3P, también denominado fosfotriosa, el azúcar más simple.
Experimento 1.- Demostración de la Reacción de Hill
La llamada reacción de Hill consiste enla liberación de O2 desde el agua. La reacción se basa en que determinadas sales del ion hierro, ferrioxalato o ferricianuro se comportan como aceptores de hidrogeno. En el caso del ferrocianuro la reacción sería:
4Fe(CN)6-3+2H2O ( O2 +4Fe(CN)6-4 + 4H+
Esta reacción permite comprobar que el agua es la fuente del oxígeno que se desprende durante el proceso de la fotosíntesis. Así loscloroplastos expuestos a la luz y en presencia de aceptores electrónicos artificiales como el 2-6,- Diclorofenol indofenol; permiten obtener una fase reducida y de una fase oxidada a partir del agua.
[pic]
azul incoloro
ESTADO OXIDADO ESTADO REDUCIDO
Procedimiento.
Utilice una suspensión de cloroplastos,obtenida mediante el siguiente método:
1.- Se pesan 50 g. de hojas de espinaca (Spinacia oleracea) y se agregue 100 ml de sacarosa 0,5M y 10ml de buffer tris 0.2M a pH 8.
2.- Se homogeniza en frío y filtra a través de una gasa doble embebida en buffer.
3.- Se toman 30ml del homogenizado y centrifuga en frío a 300g (1.700 rpm) durante 5 minuto.
4.- Se obtiene una suspensión de cloroplastos ymembranas tilacoidales.
5.- El preparado se guarda en un baño de hielo hasta su utilización.
Para evaluar la ocurrencia de la reacción de Hill proceda de la siguiente manera:
Tome tres tubos de ensayos y márquelos (1, 2 y 3 respectivamente). Forre el tubo 1 y 2 con papel de aluminio. Agregue a cada tubo 5 ml de 2-6 diclorofenol indofenol 2.5*10-4 M. A los tubos 1 y 2 adicione 1ml de lasuspensión de cloroplastos. El tercer tubo déjelo como control negativo, agregando 1 ml de agua destilada y 5ml del colorante. Coloque los tres tubos bajo una lámpara de 100W, observe de las muestras después de diez minutos. Finalmente, explique los resultados de sus observaciones.
Tabla 1. Reacción de Hill
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