Biologia del desarrollo

Sección Biología Celular

Biología del Desarrollo 2008

BIOLOGÍA DEL DESARROLLO 2008

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Biología del Desarrollo 2008

OBJETIVOS Aproximación a la técnica histológica de rutina Obtención de preparados de embriones de pollo para análisis mediante microscopía óptica de campo claro Análisis de las primeras etapas del desarrollo de embriones depollo en preparados in toto y en cortes histológicos

Esquema del práctico Dos de las técnicas básicas que permiten el estudio del embrión temprano de aves son: la observación de embriones in toto (enteros) o de cortes histológicos de embriones en diferentes estadios del desarrollo. La primera aproximación nos permite visualizar la organización general del embrión, mientras que los corteshistológicos hacen posible estudiar la organización interna en diferentes niveles y tiempos de desarrollo del embrión. En este práctico intentaremos brindar una visión general sobre la organización de uno de los modelos de estudio del desarrollo en aves. El pollo ofrece varias ventajas como modelo, entre ellas es de fácil obtención y se puede disponer de embriones en diferentes estadios del desarrollosimplemente incubándolos a una temperatura dada por el período de tiempo correcto (ver gráfica I). Sin embargo es de destacar que las primeras etapas del desarrollo (segmentación) son difíciles de observar ya que transcurren dentro del oviducto, y también es difícil obtener embriones en gastrulación en forma reproducible ya que hay pequeñas diferencias en el progreso de los embriones a través de estasetapas. Por consiguiente se trabajará con embriones incubados durante tiempos de 30-38hrs, a 37ºC en un ambiente húmedo. Los embriones se disecarán a diferentes tiempos y se procesarán para microscopía óptica reservando algunos para obtener preparados in toto. Se podrá identificar el estadio en el que se encuentren los embriones utilizando la tabla II y los atlas de embriología que seproporcionarán en clase.
Gráfica I. Influencia de la temperatura de incubación sobre el tiempo de aparición de varias de las estructuras en el embrión de pollo. (Tomado de "The Avian Embryo" Romanoff A.L. 1960)

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Tabla II: Estadios de Hamburger Hamilton
Edad 3.5-4.5 hr Características Membrana de la cascara se forma en el istmodel oviducto La pared germinal se forma del periblasto marginal 4.5-24.0 hr La cascara del huevo se forma en el útero Hoz Köller (Preprimitive streak) 6-7 hr 12-13 hr 18-19 hr 19-22 hr 23-25 hr 23-26 hr ca. 23-26 hr 26-29 hr 29-33 hr ca. 33 hr 33-38 hr 40-45 hr 45-49 hr 48-52 hr ca. 50-52 hr Línea primitiva inicial (largo: 0.3-0.5 mm) Línea primitiva intermedia Línea primitiva definitiva (largo±1.88 mm) Proceso de la cabeza (notocorda) Pliegue cefálico 1 somite; formación pliegues neurales 1-3 somites; celoma 4 somites; islas sanguíneas 7 somites; vesículas ópticas primarias 8-9 somites; pliegue amniótico anterior 10 somites; 3 vesículas cerebrales 13 somites; 5 neurómeros en el cerebro posterior 16 somites; telencéfalo 19 somites; canal atrioventricular 20-21 somites; primordio de la colaModificado de: GROWTH Altman,P.L., Dittmer,D.S. (ed) Biological Handbooks, FASEB (1962)

Cronograma del práctico: Día 1: Extracción, determinación de estadío de desarrollo y fijación de embriones de pollo. Día 2: Inclusión Día 3: Corte Día 4: Tinción y Montaje Día 5: Observación y análisis de los preparados

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Biología del Desarrollo 2008EXTRACCIÓN DE EMBRIONES Los huevos se sacan de la incubadora y se los sostiene sin girarlos entre las manos, de forma tal que queden con el extremo romo hacia arriba. Se comienza la disección rompiendo levemente la cáscara golpeando con la parte de atrás de una pinza en la parte superior del huevo, de manera tal que luego se pueda insertar una pinza y retirar de a poco la cáscara. Sobre la yema...