biologia molecular..

ELECTROFORESIS
Es una técnica de separación que consiste en el transporte de iones a través de una disolución por acción de un campo eléctrico, introducida por el químico sueco Arne Tiselius. El interés principalde este investigador fue la química de las proteínas séricas. Por su trabajo pionero en este campo, Tiselius recibió el Premio Nobel en 1948.Los métodos electroforéticos son de altasensibilidad, eficacia, poder de resolución y versatilidad.
Separa: Proteínas, Ácidos nucleicos y otras biomoleculas.
Determina: Peso molecular de una proteína, punto isoeléctrico, distingue moléculas.
Tipos de electroforesis:
• Electroforesis de frente móvil:

Aquella en la cual las partículas se mueven de forma libre en el medio en el que se encuentran dispersas. Las sustancias a separar seintroducen en un tubo en forma de U, disueltas en un tampón de pH y fuerza iónica adecuados. Se colocan los electrodos en sendos brazos del dispositivo, entre los que se crea un campo eléctrico, provocando que las moléculas de la muestra (por ejemplo: proteínas) cargadas emigren hacia los electrodos de polaridad opuesta.

• Electroforesis de zona:

La disolución a tratar se aplica como unamancha, o como una banda, y las partículas migran a través de un disolvente, utilizando además un medio soporte inerte y homogéneo, tal como el papel o ciertos tipos de geles. Esta técnica es utilizada para analizar mezclas, para determinar la pureza de una muestra, para detectar cambios de movilidad o de conformación de sustancias.
Métodos electroforéticos zonales
Son los más comunes, dada su altaaplicabilidad en diferentes campos. Son útiles para lograr la separación de mezclas complejas. Se aplican pequeñas cantidades de la disolución de proteínas a un soporte sólido, que se impregna con una solución tampón. Los soportes son en general polímeros y forman un gel poroso que restringe el movimiento de las moléculas a través del medio durante la electroforesis y disminuyen los flujos deconvección del solvente.
Como soporte han sido utilizados papel (celulosa), almidón, poliacrilamida, agarosa y acetato de celulosa, entre otros. Este método tiene gran poder resolutivo por que se aplica una cantidad pequeña de proteína a una zona estrecha, mientras que la longitud del trayecto es mucho mayor que la zona de aplicación. El equipamiento requerido es simple, fuente de poder, cubetavertical u horizontal donde se colocan el soporte y dos electrodos. Los más utilizados son:
 Electroforesis en gel de poliacrilamida:
Los geles de poliacrilamida se forman por polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecuzador, es químicamente inerte, de propiedades uniformes, capaz de ser preparado de forma rápida y reproducible. Forma, además, geles transparentes conestabilidad mecánica, insolubles en agua, relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante un tiempo prolongado. Además tiene la ventaja de que variando la concentración de polímeros, se puede modificar de manera controlada en el tamaño del poro, lamentablemente cada vez se emplea menos en diagnostico debido a su neurotoxocidad.
 Electroforesis en geles de agarosa:La agarosa es un polisacárido (originalmente obtenido de algas, como el agar-agar, pero de composición homogénea), cuyas disoluciones (típicamente de 0.5 a 2 %) poseen la propiedad de permanecer liquidas por encima de 50 grados C y formar un gel, semisólido al enfriarse. Este gel esta constituido por una matriz o trama tridimensional de fibras poliméricas embebida en gran cantidad de mediolíquido, que retarda el paso de las moléculas, se usa usualmente para separar moléculas grandes de alrededor 20.000 nucleótidos.



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