Biologia molecular



1.- OBJETIVO
Que el alumno aprenda las técnicas de preparación de frotis, fijación y tinción más utilizadas en el estudio microscópico de cultivos microbianos. Que obtenga la información básica para hacer la descripción inicial de los microorganismos.

2.- RESULTADOS DE APRENDIZAJE ESPERADOS

Adquirirás las siguientes habilidades:

1. Realizar pruebas para identificar estructurasbásicas de las bacterias.


MATERIALES:
Placas porta y cubre objetos.
Hisopos estériles
Cinco vasos de precipitación.
Asas microbiológicas
Pinzas microbiológicas.
Papel flitro
Mecheros de bunsen
Incubadoras.
Pipetas pasteur
12 pares de guantes.

REACTIVOS:
Azul de metileno
Verde de malaquita
Safranina
Acido  fosfomolíbdico
Iodo Gram
Cristal violeta
Alcohol cetona


INTRODUCCIÓNPARED CELULAR
          Debajo de las sustancias extracelulares tales como las cápsulas o capas mucosas y externas a la membrana citoplasmática está la pared celular que es una estructura muy rígida y que da forma a la célula. El espesor de la pared celular oscila entre 10 y 35 nm, sin embargo algunas paredes celulares son considerablemente más gruesas.
          Las paredes celularesbacterianas son esenciales para el crecimiento y la división. Todas las bacterias poseen paredes celulares rígidas que protegen a la célula de explotar en medios de baja presión osmótica.
          Composición química de las paredes celulares.-  Los peptidoglicanos proporcionan a la pared celular una estructura rígida. Estos grandes polímeros, están compuestos de  tres clases de bloques estructurales:N- Acetil-Glucosamina, Ácido N- Acetil-Murámico y un péptido que consta de  cuatro o cinco aminoácidos que son: L- alanina, D-Alanina, _D-Ácido Glutámico y Lisina. Además contiene proteínas con polisacáridos, lipoproteínas y lipopolisacáridos

Propiedades y Funciones: 
1. Brinda protección y resistencia a la bacteria frente a los posibles cambios de presión osmótica del medio en el que seencuentra y a la acción de ciertos agentes externos.
2. Presenta Poros que actúan como filtros, permitiendo el pasaje de agua y metabolitos esenciales.
3. Presenta antígenos de tipo y grupo específicos.
4. Participa en la división (multiplicación) bacteriana (se invagina junto con la membrana plasmática).
5. En las bacterias Gram. negativas tiene poder patógeno debido a que presenta endotoxinas(Lípido A).
6. Es el sustrato donde actúan los  - Lactámicos y otros antimicrobianos.
          La tinción para la pared celular se aprovecha del hecho de que los contenidos citoplasmáticos se pueden hidrolizar diferencialmente con ácido fosfomolíbdico, dejando la pared sin afectar. Después de teñir se puede observar la pared celular con citoplasma como ahuecado.






ESPORAS
 Sonelementos de reproducción y/o de resistencia a un medio adverso que presentan algunas bacterias, especialmente del género bacilar. Su forma, tamaño y ubicación varía según la especie. Estos cuerpos son producidos en el último estadío del crecimiento celular, que bajo condiciones apropiadas, germinan y producen la clase original de célula en crecimiento o vegetativa.




Descripción de laactividad:

PROCEDIMIENTO:
Preparación de frotis.
A. Lavar perfectamente los portaobjetos, secarlos con papel y etiquetarlos.
B. Encender el mechero y esterilizar el asa en la flama hasta que se ponga al rojo vivo. Dejar enfriar el asa para evitar la quema y destrucción de los microorganismos. Si los frotis son de cultivos sólidos, se colocará en el centro del portaobjetos una gota de agua destilada.C. Acercar la caja de Petri con el cultivo o el tubo, quitar el tapón del tubo, flamear la boca e introducir el asa para tomar la muestra.
D. Colocar la muestra en el centro del portaobjetos, extenderla suavemente en área circular de más o menos 2 cm de diámetro y esterilizar el asa. Dejar secar el frotis al aire.
D. En el caso de cultivos líquidos, se toma la muestra del tubo: de manera...