biologia

biología celular.
observacion de celulas epiteliales de la mucosa bucal in vivo
Cultivo primario de queratinocitos humanos

Se obtuvieron tres muestras de la mucosaoral en pacientes intervenidos en el Quirófano Ambulatorio del Servicio de Cirugía Oral y Maxilofacial de nuestro Centro, haciendo coincidir la toma de la muestra con eltratamiento quirúrgico bajo anestesia local, de una patología oral no maligna. La superficie de las muestras fue en todos los casos inferior a 0,25 cm2. Todos los pacientesdieron su conformidad por escrito para la toma de la muestra, previa información documentada sobre la naturaleza del estudio. El procesamiento de las muestras, se realizóen las 4 horas siguientes a su recogida. Se dividieron mecánicamente hasta obtener fragmentos del menor tamaño posible. El material resultante se sometió a un proceso dedigestión enzimática en 4 ml de Tripsina/EDTA (T/E) durante 30 minutos a 37º C y bajo agitación suave. Se recogió el sobrenadante, que fue centrifugado durante 10 minutosa 1400 rpm, de manera que las células suspendidas en el líquido se depositaran en el fondo del tubo de ensayo. El pellet resultante se diluyó en 0,5 ml de medio de cultivopara contar las células obtenidas. Las células obtenidas se cultivaron, a una densidad de entre 5.000 y 12.000 cel/cm2 en placas de cultivo celular en presencia defibroblastos de ratón (3T3; European Collection of Animal Cell culture 85022108) letalmente irradiados. Este medio se cambió cada 3 días. A partir del primer cambio se leañadieron al medio EGF (Factor de Crecimiento Epidérmico, Austral Biologicals). Los cultivos se mantuvieron en estufa con una atmósfera húmeda con un 5% de CO2 a 37ºC.