Biologia

Coloración GRAM


Juego de soluciones para la coloración diferencial de GRAM para microscopía

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
•
La solución R1 Violeta Cristal (Violeta de Genciana) y la solución R4
Fuscina básica o Safranina son irritantes en contacto con piel, ojos y
mucosas.
•
La solución R3 Alcohol acetona y la solución R4 Fuscina básica o
safranina son inflamables, por lo tanto sedeben tomar los cuidados
requeridos para el manejo de productos inflamables en el laboratorio.
•
Observe la simbología en los rótulos de las soluciones.
•
Las soluciones usadas y las caducadas deben eliminarse como
desechos especiales, debiendo cumplir las regulaciones locales para
el desecho de compuestos peligrosos.

PRINCIPIO
La coloración de Gram ha constituido, desde los albores dela
Bacteriología, un elemento fundamental para la taxonomia e identificación.
Luego del descubrimiento casual realizado por el investigador danés
Christian Gram, pasaron muchos años durante los cuales se efectuaron
las más variadas especulaciones sobre el mecanismo de esta coloración.
Resultaba indudable, sin embargo, su practicidad a los fines de la
identificación. El conocimiento de lasestructuras de las membranas
bacterianas, tanto en el aspecto físico como en su composición molecular
que fueron logrados a partir de la década del sesenta, demostraron que la
coloración de Gram distingue dos grupos de bacterias totalmente
diferentes. Las bacterias Gram positivas que presentan una gruesa capa
de peptidoglicano como estructura fundamental por sobre la membrana
citoplasmática, ylas Gram negativas, que encima de ésta, presentan una
delgada capa de peptidoglicano, a la que se superpone una capa de
lipopolisacáridos-lipoproteína, denominada membrana externa. La
presencia de esta membrana diferencia actualmente dos divisiones en
sistemática bacteriana: las que no lo poseen, Firmicutes (Gram +) y las
que sí, Gracilicutes (Gram -). La diferencia entre ambos grupos es puesde enorme importancia taxonómica. El comportamiento como patógenos y
en la sensibilidad antibacteriana difieren sustancialmente; de ahí que la
realización rápida de una coloración de Gram, reviste enorme importancia
en Bacteriología Clínica.
Esta coloración permite la clasificación de las bacterias en GRAM
POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS SEGÚN LA COMPOSICION DE SU
PARED CELULAR.
Por esto elcomplejo de color formado con la pared de las bacterias gram
positivas no puede ser removido con el agente decolorante que es el
alcohol acetona.
La célula permanece de color azul violeta, en cambio las bacterias gram
negativas, al decolorarse con el alcohol acetona, se dejan colorear con la
fuscina ó safranina, quedando de color rosado.

MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS•
•
•
•

Toda muestra biológica
potencialmente infecciosa.

VIOLETA CRISTAL (VIOLETA DE GENCIANA) para GRAM
–Listo para su uso
2g
1g
100ml

0.4 g
0.6 g
100 ml

se

considerada

como

3. Cubrir la preparación (Placa) con
LUGOL (Solución Yodo/Yoduro) para GRAM
por un (1) minuto.

80%
20%

4. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.
5. Decolorar la placa conALCOHOL ACETONA Solución decolorante para GRAM
Por 15 - 30 segundos hasta que la placa decolore totalmente.

0.3 g
90 ml
10 ml

Alternativa
SAFRANINA GRAM
–Listo para su uso
Safranina O R.A.
Alcohol etilico al 96%

debe

2. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.

FUSCINA BASICA
–Listo para su uso
Fuscina básica R.A.
Fenol al 5%
Alcohol etilico al 96%

•
•Frasco lavador
Agua
Mechero Bunsen o alcohol
Cronometro y/o timer

1. Cubrir la preparación (Placa) fijada con
VIOLETA CRISTAL (Violeta de Genciana) para GRAM
por un (1) minuto.

ALCOHOL ACETONA Decolorante para GRAM
–Listo para su uso
Alcohol Etílico al 96%
Acetona R.A.

•

PROCEDIMIENTO

LUGOL (Solución Yodo/Yoduro) para GRAM
–Listo para su uso
Yodo metalico R.A....