biologia

5. Investigue que tipo de colorantes pueden emplearse para teñir el ADN.
R/ La tinción de Feulgen
Es una técnica de tinción descubierta por Robert Feulgen y usada en histología para identificar material cromosómico o ADN en células. Depende de la hidrólisis ácida del ADN.
El material es sometido a una hidrólisis con ácido clorhídrico 1N a 60 °C, o 5N a temperatura ambiente, y luegoal reactivo de Schiff.
La reacción Feulgen es una técnica semicuantitativa. Si el único aldehído que queda en la celula son los producidos de la hidrolisis del ADN, ahí la técnica es cuantitativa para el DNA. Es posible usar un instrumento, conocido como microdensitómetro o microespectrofotómetro para medir la intensidad de la reacción Feulgen para un orgánulo. Usando este proceso, se determinó que eninterfase, las células estaban compuestas de dos grupos de cromosomas. Uno con un grupo diploide y otro con un grupo tetraploide (dos grupos genómicos completos). El núcleo se observaba idéntico, pero uno de ambos poseía el doble de ADN. Esto dio a la división del periodo que conocemos como interfase en el ciclo celular a G1, S y G2 basados en la síntesis de ADN.

Colorantes fluorescentes
Haymuchos tipos de colorantes fluorescentes. En general para que una molécula tenga fluorescencia tiene que tener una estructura con anillos aromáticos de manera que los electrones resuenen en ella. Según la cantidad de electrones resonantes fluorescerá en un color o en otro. Esto es así porque cuando la molécula recibe luz los electrones absorben energía y se excitan, y en estas moléculas al volver a suorbital normal emiten la energía como luz y no sólo como calor. Son moléculas que tú excitas con una luz de determinado color y luego ellas emiten luz de otro color. Son muchas las que se usan, y cada vez inventan más, pero voy a hablar de las que se usan para unirse al ADN. Son moléculas que por sus propiedades tienen afinidad por el ADN, de manera que se emplean para detectarlo. Por ejemplo, eluso en la FISH para ver todo el cromosoma entero, y así saber en qué zona está situada mi sonda. 
En FISH el colorante más utilizado actualmente es el DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindol) que se une a la doble hélice metiendose en el medio del canal menor (otro día os cuento la estructura de la doble hélice para que entendais bien lo del canal mayor y el canal menor). Este fluorocromo pinta de azullos cromosomas cuando se los ilumina con luz UV. En la foto veis un gusano (Caenorhabditis elegans) teñido con DAPI y los núcleos de sus células fluorescen.Antes se usaba el Hoechst 33342 o 33258, que es similar. Tiene el mísmo método de unión al ADN y también se ve azul, aunque algo más clarito. La verdad es que no sé por qué se dejo de usar y ahora se usa el DAPI, pero cuando miras artículos deFISH siempre usan el DAPI.
Bromuro de Etidio, este colorante es distinto tanto en su uso como en su unión al ADN.

Lo quehace es meterse entre los pares de bases (los peldaños de la escalera de caracol que sería la doble hélice de ADN) como veis en el dibujo (en el que por cierto también explica con que es el canal o surco mayor y el canal o surco menor). El uso que le damos a este tinte esprincipalmente para teñir los geles de agarosa. Estos geles se usan para separar el ADN que hemos fragmentado o amplificado según su tamaño. De modo que como el bromuro se une al ADN cuando iluminamos el gel con luz UV vemos bandas fluorescentes en las zonas donde hay ADN, y así podemos localizarlo.










Tinciones para Ácidos Nucleicos
Tinción de Feulgen

Tiñe el ADN y cromosomasde color rojo-violeta


Naranja de acridina

Tiñe ADN y cromosomas de color verde fluorescente, ARN y ribosomas en color rojo fluorescente


DAPI

Tiñe ADN de color azul-celeste fluorescente


Bromuro de etidio

es un agente intercalante usado comúnmente como marcador de ácidos nucleicos en laboratorios de biología molecular para procesos como la electroforesis en gel de agarosa....