biologia

METODOLOGÍA.
Primero se impregno las paredes de una jeringa esteril con un anticoagulante (heparina)
Con esa misma jeringa se obtuvo sangre venosa de compañeros de clase
Para la siembra sedepositaron 5 ml. De medio de cultivo (McCoy 5ª mod) en un frasco de cultivo esteril.
Posteriormente se añadieron 0.2 ml de fitohemaglutinina junto con 0.02 mlde antibac
Enseguida se retiro la aguja dela jeringa que contenia la sangre y se depoditaros de 6 a 8 gotitas en el frasco del medio de cultivo, teniendo cuidado de no chorrear por las paredes para después ponerlos a incubar a 37 gradoscentígrados por 72 horas.
Para realizar la COSECHA después de la incubación se añadieron 0.2 mlde colcemid al cultivo y se incubo por una hora más
Se resuspendio el cultivo con una pipeta y se centrifugo a1500 rpm durante 10 minutos
Después se retiro el sobrenadante dejando un botón celular con medio cm de sobrenadante y se resuspendio este botón con un agitador añadiendo una solución hipotónica( KCl0.75 M) y se incubo a 37°c por 20 minutos
Y se volvió a centrifugar a 1500 rpm durante 10 minutos
Después se volvió nuevamente a resuspender el botón retirando el sobrenadante
Enseguida sefijaron las células con una mezcla de metanol y acido aceticoen proporción 3:1 centrifugandolo nuevamente ( 1500 rpm por 10 minutos)
Se lavo el material retirando el sobrenadante, resuspendiendo ,añadiendo fijador nuevo y repitiendo la centrifugación.repitiendo estos pasos hasta obtener un sobrenadante claro y transparente
Para hacer las PREPARACIONES se lavaron y desengrasaron portaobjetosposteriormente colocándolos en hielo.
Después se goteo toda las suspensión celular obtenida en la fase anterior, inmediatamente se paso el portaobjetos por el mechero encendido hasta secar totalmente elportaobjetos.
Se etiquetaron los porta con el nombre de quien elaboro la técnica y del donador de la sangre y se sumergio en unas solución con giemsa al 5% en agua corriente durante 10 minutos...