Biologia

CROMATOGRAFÍA PRINCIPIOS Y APLICACIONES
ANÁLISIS QUÍMICO
Prof. Manuel Chicharro 1º Ciencia y Tecnología de los Alimentos
Ana Isabel Bautista Alicia Benayas Yolanda Alicia Ortiz

ÍNDICE
1. Conceptos básicos sobre cromatografía..................................... 1.1 Introducción................................................................. 1.2 Basecientífica.............................................................. 1.3 Terminología en cromatografía.................................... 3 3 4 4

2. Cromatografía plana y en columna……………………………. 7 2.1 Cromatografía en papel……………………………….. 7 2.2 Cromatografía en capa fina…………………………… 7 2.3 Cromatografía en columna……………………………. 11 3. Cromatografía Líquida de Alta Resolución. HPLC…………… 3.1 Fundamentos y principios básicos…………………… 3.2Instrumentación………………………………………. 3.3 Aplicaciones al análisis de los alimentos…………….. 13 13 16 18

4. Cromatografía de gases………………………………………… 19 4.1 Fundamentos y principios básicos……………………. 19 4.2 Instrumentación………………………………………. 19 4.3 Aplicaciones al análisis de los alimentos……………... 21 Bibliografía………………………………………………………...22

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1. CONCEPTOS BÁSICOS SOBRE CROMATOGRAFÍA
1.1 INTRODUCCIÓN
Lacromatografía es una técnica que se emplea para separar entre si los componentes de una sustancia. Esta técnica fue creada por el botánico ruso Michael Tswett en 1906, el cual llamó a su método cromatografía, palabra griega que significa escritura a color, porque lo utilizo para separar compuestos coloreados. Tswett llevó a cabo una extracción de una mezcla de pigmentos de hojas verdes utilizandoéter de petróleo, un disolvente no polar, y descubrió que era capaz de separar los pigmentos al hacer pasar el extracto a través de una columna, un tubo de vidrio rellenado con carbonato de calcio (tiza).Tswett utilizó como detector del experimento la simple observación, ya que los compuestos que separó tenían color y era posible detectar bandas o zonas de distintas materias por su color en lacolumna, demostrando que la clorofila es solo uno de los muchos pigmentos que se encuentran en las hojas de las plantas. A pesar de que el método cromatográfico prometía simplificar la separación de sustancias de mezclas complejas, no fue sino hasta finales de la década de los 30 y principio de los 40 cuando se empezó a desarrollar la técnica teniendo este método diversas aplicaciones. En laactualidad la cromatografía se emplea principalmente para separar compuestos incoloros pero el nombre permanece para describir cualquier técnica que se base en los mismos principios. La columna sencilla de Tswett, un tubo vertical de cristal, abierto por su parte superior, rellena de un sólido común donde el eluyente se mueve conducido por su propio peso, ha evolucionado hasta los modernos equipos quehoy conocemos (fig1).

Fig. 1. Cromatógrafo de gases con espectrómetro de masas

Fig. 2. Equipos para HPLC (C. de alta resolución para líquidos)

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1.2 BASE CIENTÍFICA
En la cromatografía se separan los componentes de las mezclas a medida que son transportadas por un fase fluida móvil a través de una fase estacionaria sólida o líquida, la separación de las moléculas se logra porque lamovilidad de cada soluto depende de un equilibrio en la distribución entre la fase móvil y la estacionaria, y esta separación se puede realizar en función de sus cargas, masas, tamaños moleculares, la polaridad de sus enlaces, sus potenciales redox… Como resultado hay una gran variedad de técnicas para llevar a cabo la separación de una sustancia, que se clasifican en cuatro grandes grupos según elmecanismo de separación: • C. de reparto: separa los solutos basándose en la solubilidad. • C. de adsorción: se basa en la afinidad de adsorción. • C. de exclusión: separa solutos según el peso molecular. • C. de intercambio iónico: separa solutos según la carga iónica. También se pueden clasificar según el estado de la fase móvil en : • C. de gases: la fase móvil es un gas y pueden ser dos...