Biologia

INGENIERÍA GENÉTICA
Conjunto de técnicas, nacidas de la Genética Molecular, que permiten manipular el genoma de un ser vivo, por ejemplo introduciendo genes en él aunque sea de otra especie biológica, incluso la inserción de genes animales en plantas, para que produzca determinada proteína.
Debemos diferenciarla de otras técnicas de la biotecnología como las de manipulación celular o nuclear,aunque muchas veces la ingeniería genética utiliza la clonación celular para sus propósitos.
Actualmente la ingeniería genética se basa principalmente en las siguientes tecnologías:

1) ADN recombinante , formado al intercalar un segmento de ADN extraño que contiene un gen que queremos que se manifieste, por ejemplo el gen de la insulina humana, en un ADN celular receptor, porejemplo de una bacteria. Utiliza “enzimas de restricción” capaces de "cortar" el ADN en puntos concretos.
2) Secuenciación del ADN: saber el orden o secuencia de los nucleótidos de un gen.
3) reacción en cadena de la polimerasa PCR: aumentar el número de copias a partir de una mínima cantidad de fragmentos de ADN.

ADN recombinante.- Fig. 4 pág 268, fig 6 pág 270 yfotocopias.

Formado al intercalar un segmento de ADN extraño con determinado gen deseable, por ej el gen humano de la insulina, en un ADN celular receptor, por ej. el de una bacteria para obligar a esta a producir insulina.
“Clonación del gen de la insulina humana en bacterias”

Podemos diferenciar las siguientes etapas:

1º) Obtención de los RNAm de la insulina.
A partir de células pancreáticashumanas rotas por ósmosis o criofracturación, se extraen todas sus enzimas, proteínas, DNA, ..etc incluidos todos los RNAm que codifican la síntesis de insulina humana. Luego se separan y aíslan esos RNAm de la insulina por ultracentrifugación gracias a a sus distintos pesos moleculares y formas características. Los RNAm escogidos deben ser los ya maduros (sin intrones).

2º) Obtención de unDNA bicatenárico de la insulina.
A partir de precursores y transcriptasas inversas obtenidas de virus se obtiene a partir de esos RNAm, primero un DNA de la insulina monocatenárico y luego uno bicatenárico usando una DNA polimerasa.

3º) Adición o inserción del DNA de la insulina en un plásmido bacteriano.
Los plásmidos son pequeñas moléculas de ADN circular con un tamaño menor que el delcromosoma bacteriano y que se replican con independencia ya que tienen su propio origen de replicación.
Previamente se “cortan” los plásmidos utilizando un tipo de enzimas bacterianas conocidas como “enzimas de restricción” que pueden considerarse como "tijeras moleculares" ya que cada tipo reconoce una secuencia específica de nucleótidos y corta en ese punto cada una de las cadenas de ADN (se hanaislado más de 300). Los extremos libres que quedan se llaman extremos pegajosos, porque pueden unirse a otros fragmentos de ADN que hayan sido cortados por la misma enzima de restricción. Los extremos “pegajosos” estan escalonados, es decir, el corte no se produce a la misma altura en las dos hebras de DNA.
También se debe “preparar” el DNA de la insulina añadiéndole una secuencia de nucleótidosen sus extremos que coinciden con los nucleótidos de la zona de corte del plásmido. Se trata luego con la misma enzima de restricción para obtener en la molécula de DNA con el gen de la insulina también “extremos pegajosos”.
Además del “origen de replicación”, los vectores de clonación (plásmidos en este caso) deben llevar otros genes denominados “marcadores”, que sirven para identificar lascélulas que contienen el vector de clonación. Se suelen utilizar como marcadores, genes de resistencia a antibióticos que sirven para identificar bacterias que contienen el vector de clonación, porque estas bacterias serán resistentes al antibiótico del gen marcador.
El siguiente paso será introducir el vector de clonación que contiene el gen que se quiere clonar en la célula hospedadora, para que...