biologia

Universidad de Concepción
Facultad de Ciencias Biológicas
Departamento de Microbiología

Laboratorio n° 4
Genética Bacteriana
Mutación

Nicole Burger Acevedo
16 de Mayo, 2014
Profesor Miguel Martínez

Introducción
Las bacterias son microorganismos con gran capacidad para adaptarse a las diferentes condiciones ambientales, lo cual, en gran medida se debe a las mutaciones.
Elcromosoma bacteriano es circular y haploide, y en él se encuentra codificada toda la información genética que permite la mantención y perpetuación de la célula bacteriana. Durante la división celular se replica y, al término de la división celular, las células hijas resultantes son genéticamente iguales (Martínez et al 2003).
La mutación es un cambio hereditario en la secuencia de bases del ácidonucleico genómico de un organismo (Mardigan et al 2003), y puede implicar cambios tanto en pocos pares de bases, como la inserción o deleción de genes completos.
Estas mutaciones pueden dar origen a la variabilidad genética y conferirles propiedades evolutivas y mejoras en el fenotipo bacteriano. Es por lo anterior, que se puede explicar que las mutaciones den origen a la resistencia a losantibióticos, la cual se heredará y generará descendencia con modificaciones en sus genes, entonces, al mutar las bacterias, estas podrán mostrar resistencia a ciertos antibióticos a los cuales, sin mutación, eran sensibles, formando halos alrededor de estos.
En éste laboratorio se realizarán antibiogramas para detección de mutación mediante la selección de bacterias mutantes, donde se espera encontrarbacterias resistentes o susceptibles a antibióticos

Materiales y métodos
Se extrajeron gotas de un cultivo de Escherichia coli de la cepa K 12y se añadieron a un tubo de ensayo que contenía 2 ml de agua destilada, esto, hasta que se notara una pequeña turbidez en el agua. Luego la muestra fue homogenizada para así extraer con una tórula, un poco de la disolución, la cual posteriormente fuesembrada en una placa que contenía agar tripticasa (AT) y otra que contenía agar tripticasa y el antibiótico Rifampicina de 50 µg/ml.
Con la primera de estas placas, luego de siembra, se realizó un antibiograma, el que consiste en la adición de 6 diferentes antibióticos: Ampicilina (AM) de 10 mcg, Ácido Nalidixico (W30) de 30 mcg, Kanamicina (K) de 5 mcg, Rifampicina (R) de 5 mcg, Tetraciclina (T30)de 25 mcg y Cloxacilina (CX) de 5 mcg. Ambas placas fueron incubadas en una estufa a 37°C durante 48 horas.
Transcurrido éste tiempo, se realizó un segundo biograma, con mutantes de la placa que contenía Agar Tripticasa y Rifampicina. Utilizando un asa curva, se extrajo una pequeña parte de alguna de las colonias formadas, y se disolvió en un tubo de ensayo con agua estéril.
Desde este tubo seesparcieron con una tórula las células de E. coli diseminándolas por la superficie de la placa con agar tripticasa para realizar un antibiograma con los mismos discos de antibióticos que el primer antibiograma y se dejó incubar por 48 horas a 37 grados
Finalmente con una regla normal al igual que el antibiograma anterior se mide el diámetro de los anillos más cercanos a los discos deantibióticos.

Resultados
Luego de cultivar las placas por 48 horas a 37 ºC, se pudo visualizar claramente en la placa con Agar Tripticasa, el efecto ejercido por los antibióticos en la forma de un halo inhibitorio alrededor de cada una de las circunferencias antibióticas a la cual las bacterias eran resistentes (Tabla nº1)
En la placa con medio de cultivo con Rifampicina, y siembra de la misma muestraanterior, se formaron 6 colonias.
En la placa donde se realizó el segundo antibiograma, se observa que además de los antibióticos, a los cuales las bacterias fueron resistentes en el antibiograma anterior, éstas fueron resistentes a la Rifampicina.

Tabla : Díametro de los halos inhibitorios alrededor de cada antibiótico
Antibiótico
Diámetro de halo
Primer Antibiograma (cm)
Diámetro de...