Biologia

Universidad Nacional Autónoma de Honduras
Facultad de Ciencias
Escuela de Biología



Laboratorio de Técnicas Histológicas



Practica 5
Microtomía, Corte y Coloración














RESUMEN

En el laboratorio de Técnicas Histológicas se realizaron diferentes pasos para la preparación de placas fijas con tejido vegetal, estas para estudios de microscopia. Losprocedimientos a los que se someten un o los tejidos son desde deshidratación, fijación, cortes, y coloración, siendo como un último proceso el montaje del tejido procesado en un porta objeto (este con un procedimiento especifico), siendo listo para luego observar la imagen contrastada bajo un microscopio.

INTRODUCCION

El proceso histológico comienza con la obtención del tejido objeto de estudio.Este procedente de tejidos vegetales, donde la muestra o las muestras son tomadas de distintas partes u órganos que componen el cuerpo de la planta. En este caso las muestras son habitualmente fijadas en una solución líquida que contiene una sustancia denominada fijadores, la cual mantiene las estructuras celulares y moleculares en sus posiciones iniciales durante el procesamiento posterior.Normalmente, tras la fijación se procede a incluir el tejido para posteriormente obtener secciones. Para la obtención en la fineza o que tan delgado se requiere que sea nuestra sección, tenemos que endurecer nuestra muestra, consiguiéndolo ello, embebiendo el tejido en una sustancia líquida que posteriormente se volverá consistente (parafina). Tras la inclusión se procede a cortar los tejidos,(micrótomo), donde las secciones obtenidas, hay que procesarlas para poder observarlas, donde, en su normalidad las secciones o los tejidos obtenidos de los cortes se tiñen o se colorean con un colorante que es hidrosoluble, (Safranina) por lo que hay que eliminar el medio de inclusión para que el colorante pueda unirse al tejido. Al final todos los tejidos procesados se observan con los microscopios,colocados en placas fijas.

OBJETIVOS

Conocer los procesos histológicos por los cuales son pasados los tejidos antes de estar en una placa fija.

Realizar los pasos requeridos para la extracción de los tejidos, su fijación, cortes y coloración para la obtención de un montaje o placa fija.

Obtener placas fijas para estudios microscopios de los tejidos obtenidos.







MATERIALESReactivos (alcoholes, Xilol)
Colorantes (Safranina)
Soluciones adherentes: Adhesivo de Haupt (albúmina, granos de timol, glicerina) y Permoount.
Medios de inclusión: parafina
Matraces y Beakers (volúmenes variables)
Probetas graduadas (calibres variables)
Tubos de ensayo
Embudos
Varillas de vidrio para agitar
Capsulas de Petri
Láminas portaobjetos y cubreobjetos
Coplins
Guantes,mascarillas, gabacha de laboratorio
Equipo de disección: mangos de bisturí, Cuchillas (Guillet) pinzas
Algodón
Pinzas (sujetador de láminas)
Pinceles
Perillas
Estufa y Olla
Barras de Leukart
Placa de Cobre
Cepillos para lavar cristalería




















METODOLOGIA

Para concretar los resultados obtenidos fue seguido por una serie de pasos que a continuación sedescriben.


OBTENCION Del TEJIDO

Se realizaron cortes transversales de Coleus sp. Y Petroselium sp. (Ver fig. 1.)


Figura 1. Muestras de tejidos


FIJACION

Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas que tienen varias finalidades:
Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado in vivo.
Aumentar la dureza del tejido parafacilitar la preparación de finas películas de éste.
Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos.
Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren a la muerte de la célula.

El fijador utilizado fue el de mezclas de Formalina Acido y Alcohol (FAA) (ver fig. 2)


Figura 2. Equipo y materiales para la mezcla del fijador (FAA).


DESHIDRATACION y ACLARAMIENTO...