Biologia

Guión de la práctica
Diagnóstico genético molecular del polimorfismo de globina beta S mediante RFLP
(Práctica en laboratorio virtual Cibertorio)
Fundamento:
La anemia drepanocítica (anemia de células falciformes) se origina por la mutación de un solo nucleótido en el gen de globina beta humana. Esto genera en la población un polimorfismo, definido por la presencia del alelo normal o elmutado, en cada uno de los dos cromosomas 11 homólogos.
Pretendemos estudiar el posible diagnóstico genético de esta enfermedad a través de un polimorfismo RFLP, es decir, mediante restricción y electroforesis.
Como material de partida disponemos de muestras de DNA (virtuales) correspondientes a una parte de ese gen, para las dos variantes (normal, AA o WW, y drepanocítica, SS).
Por lo tanto,vamos a estudiar un locus que corresponde a una parte del gen de globina beta y que contiene el punto polimórfico.
Más información (no necesaria para la práctica):
Concretamente, las muestras comprenden el exón 1, el intrón A, el exón 2 y parte del intrón B.
Recuerda que el polimorfismo se sitúa en el exón 1.

Aclaración de la nomenclatura:
A la hemoglobina normal del adulto, 2 2 , se lallama habitualmente hemoglobina A; de ahí el nombre A para el alelo normal de la globina beta aquí estudiado. También se representa como W, de wild type (tipo salvaje o silvestre).
La hemoglobina de las células falciformes (sickle cells), 2 S2 , se denomina hemoglobina S.

A lo largo de la práctica tendrás que conservar información para pasarla de una ventana a otra del programa; utiliza paraello el “Bloc de Notas” de Windows. Conviene que añadas tus propios comentarios para identificar la información que vas guardando; puedes imprimirlo al acabar, para llevarte toda la información e incluirla en tu cuaderno de prácticas.
Ayuda para copiar y pegar texto: utiliza el menú que aparece al pulsar el botón derecho del ratón o, con el teclado, pulsa Ctrl+C para copiar y Ctrl+V para pegar.Bibliografía:
J. Luque y A. Herráez (2001) Texto Ilustrado de Biología Molecular e Ingeniería Genética, págs. 381-383. Ediciones Harcourt / Elsevier España, Madrid.

Cómo comenzar:
El laboratorio virtual funciona dentro de una página web, por lo que debes comenzar abriendo el navegador de internet (Internet Explorer o Firefox).

Una vez que se abra el programa, debes buscar la página deCibertorio:
Puede estar en los “Favoritos” o “Marcadores”; si no, visita http://biomodel.uah.es/lab/cibertorio/
Ensayo:
diagnóstico genético de drepanocitosis mediante RFLP
Objetivo:
Empleando una enzima de restricción elegida previamente, que corta de forma diferente los alelos normal y mutado del gen de globina beta, realizar el diagnóstico genético de cuatro pacientes.
Materiales virtuales:Software:
• Laboratorio virtual de biología molecular “Cibertorio”
Reactivos virtuales:
• Enzimas de restricción (deben comprarse en BobCoTM, como se explica más adelante)
• Grupo de muestras para diagnóstico genético (también comprado en BobCoTM), que contiene las siguientes muestras de DNA:
• DNA del gen de globina  de una persona homocigótica normal (representada como AA o WW).
• DNA delgen de globina  de una persona homocigótica falciforme (representada como SS).
• Cuatro muestras de DNA de pacientes cuyo genotipo se pretende averiguar (designadas Pt1, Pt2, Pt3 y Pt4).
• Marcador de masa molecular de DNA (gratuito, de BobCoTM)
• Tampón universal de restricción 10x (gratuito, de BobCoTM)
• Agua
• Puntas de pipeta amarillas, capacidad de 1 a 100 L
• Agarosa
• Tampón deelectroforesis TBE (Tris/Borato/EDTA)
• Bromuro de etidio
• Colorante de carga de muestras en el gel (contiene azul de bromofenol, xileno-cianol y glicerol)
Instrumentación virtual:
• Micropipeta variable hasta 100 L
• Incubador con regulación de temperatura BobCo Temp-O-MaticTM
• Cubeta de electroforesis horizontal en agarosa BobCo Gel-O-MaticTM
• Fuente de corriente continua BobCo...