biologia

Elaboración de bibliotecas de ADN con fago 1 y otros vectores de clonación
La mayor parte de la clonación de ADN se efectúan con vectores plásmidos de E.coli, debido a la relativa sencillez del procedimiento de clonación .
Sin embargo , la cantidad de clones aislados que se pueden obtener por clonación de plásmidos está limitada por la eficiencia relativamente baja de transformación deE.coli y la pequeña cantidad de colonias transformadas capaces de crecer en la placa de cultivo típica.
La colección de clones que incluyen todas las secuencias de ADN de una especie determinada se denomina:
Biblioteca de ADN
Biblioteca genómica
Una vez preparada una biblioteca genómica, se la puede estudiar para buscar los clones que contienen una secuencia determinada.
El bacteriofagoʎ puede modificarse para usarlo como vector de la clonacion y ensamblaje in vitro
Es probable que el bacteriófago ʎ sea el virus bacteriano mas estudiado; de el se conoce gran parte de su biología molecular.
Un virion de fago ʎ tiene una cabeza, que contiene el genoma ADN viral,una cola, que actúa en la infección de las células huésped de E.coli.

Cuando el ADN ʎ ingresa en el citoplasma de lacélula huésped, después de la infección, sufre proliferación lítica o losogénica.
En la proliferación lítica del ADN viral se replica y ensambla para formar una progenie de 100 viriones en cada célula infectada .
En la proliferación lisogénica el ADN viral se inserta en el cromosoma bacteriano, donde se replica en forma pasiva junto con el cromosoma de la célula huésped a medida que lacélula crece y se divide.
Durante el ensamblaje in vitro de viriones ʎ , dentro de células huésped infectadas, primero se arman las cabezas y las colas virales por separado, a partir de múltiples copias de las distintas proteínas que componen estas estructuras complejas.


La replicación de ADN ʎ en una célula huésped genera largas moléculas de ADN ʎ milimétricas , denominadas concatomeros,son múltiples copias del genoma viral unidas extremo a extremo y separadas por secuencias de nucleotidos especificos, denominados COS.
Dos proteínas ʎ , denominadas Nu1 y A, se fijan a los sitios COS y dirigen la inserción dentro de una cabeza ya ensamblada del ADN ubicado entre dos COS adyacentes .
Este proceso provoca en empaquetamiento de un unico genoma ʎ = 50 kb proveniente delconcatomero multimetrico dentro de cada cabeza preensamblada.

Una vez insertado el ADN ʎ dentro de la cabeza ʎ ya ensamblada , se adosa la cola preensamblada para formar el virion completo .

Mediante la clonación se puede preparar bibliotecas ʎ genómicas casi completas de organismos superiores
Con los vectores de clonación de fago ʎ disponibles es posible la preparación de bibliotecasgenómicas de organismos superiores, entre ellos el hombre
Una biblioteca genómica comprende un juego de clones ʎ ( o plásmidos ) que, en conjunto, contiene todas las secuencias del ADN genómico .
Primero se trata del ADN ʎ con una enzima de restricción, para producir fragmentos denominados brazos vectores ʎ con extremos adhesivos, que en conjunto contienen todos los genes necesarios para laproliferación lítica. Este paso libera la región no esencial central del genoma ʎ , que se separa de los brazos ʎ y se descarta.
Luego se extrae el ADN genómico de un tipo celular que contiene toda la información genética del organismo que se desea estudiar.
A menudo se utiliza espermatozoides o células de un embrión temprano como fuente de ADN de mamíferos. Los brazos ʎ y la colección defragmentos de ADN genómico se mezclan en cantidades equivalentes.}
Los extremos adhesivos complementarios de los fragmentos y de los brazos ʎ se hibridan y luego son unidos en forma covalente por acción de la ADN ligasa.
Cada una de las moléculas de ADN recombinante obtenidas contienen un fragmento de ADN extraño ubicado entre los dos brazos del ADN del vector ʎ
Luego, los ADN...