Biologia

ACTIVIDAD EXPERIMENTAL II
Cuantificación de la proteína BADH purificada y evaluación del rendimiento del método de purificación.
OBJETIVOS
_Cuantificar laproteína presente en las fracciones ExP y ENZ y calcular el rendimiento del proceso de purificación utilizado en la unidad experimental I.
_Calcular el coeficiente deabsorción molar de la BADH, presuntamente pura en la fracción ENZ.
INTRODUCCIÓN
La cuantificación de proteínas es un procedimiento de rutina en los laboratorios endonde se hace investigación en bioquímica. Existen métodos con diferente sensibilidad para determinar la cantidad de proteína en una muestra (Tabla 1). Los principiosutilizados son la capacidad de estas biomoléculas para absorber luz UV, o su reacción con diferentes sustancias empleadas en los métodos colorimétricos. Dentro de laprimera clase de determinaciones puede hacerse la lectura a una longitud de onda de 205 nm, en donde absorben los enlaces peptídicos, mientras que para estimar la cantidad deproteína con base en el contenido de 3 residuos que fungen como cromóforos (Trp, Tyr y Cys-Cys), la lectura debe hacerse a 280 nm (1). Con base en esta últimapropiedad de las proteínas, es posible establecer la absortividad o coeficiente de extinción molar () de una proteína en particular, siendo este parámetro la suma ponderadadel coeficiente de absorción de los aminoácidos mencionados a 280 nm, y que permite cuantificarla si se encuentra pura (2, 3). Método Rango de detección
Lectura a 205nm 1-100 g
Lectura a 280 nm 20-300 g
Lowry (reducción alcalina de cobre) 5-100 g
Bradford (azul de Coomassie) 1-50 g
Ácido bicinchonínico 0.2-50 g