biologia

LDL-CHOLESTEROL
FUNDAMENTO
Este método directo para cuantificar el colesterol en las lipoproteinas de baja densidad (LDL) se basa en una prueba enzimática homogénea en la que la precipitacióndiferencial y la posterior sedimentación del resto de lipoproteínas y quilomicrones
Ha sido eliminada. El procedimiento consta de dos etapas. En la primera el colesterol
de las lipoproteínas distintas alas LDL presentes en la muestra se descomponen por la acción simultánea de la colesterol esterasa(CE) y la colesterol oxidasa (CO) a pH 7,0, dando como productosfinales colestenona y peróxido dehidrógeno convirtiéndose éste último en oxígeno y agua por la acción de la catalasa. En una segunda etapa, un tensioactivo que actúa específicamente sobre la LDL se añade al producto del paso anterior,cuantificándose el colesterol residual mediante una reacción tipo Trinder en la que el derivado anilínico, HDAOS*, y la 4-aminoantipirina (4-AA) se condensan por el H2O2 en presencia de peroxidasa (POD)para formar una quinonaimina roja proporcional a la concentración de colesterol-LDL de la muestra.
MUESTRAS
Suero o plasma heparinizado u obtenido con EDTA. El paciente estará en ayunas desde lanoche anterior a la extracción. Separarlas células dentro de las 3 horas siguientes a la venipuntura. Las muestras pueden conservarse 2 semanas a 4-8ºC ó 3 meses a –20ºC

TECNICA
Equilibrar reactivosy muestras a temperatura ambiente.
Pipetear en cubetas rotuladas:

Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC.
Añadir:

.
Mezclar por completo e incubar 5 minutos adicionales a 37ºC.
Leer laabsorbancia (A) de la muestra y del calibrador a 600 nm frente al blanco de reactivo.


Valores de referencias







HDL-CHOLESTEROL
FUNDAMENTO
Esta técnica1 emplea un método de separación basadoen la precipitación selectiva de las
Lipoproteínas conteniendo apoproteinas-B (VLDL, LDL y (a)Lpa) por acción del ácido
fosfotúngstico/Cl2Mg, sedimentación del precipitado por centrifugación y...