Biologia

Según Berger Luego de la extracción, es necesario verificar la cantidad y la calidad del ADN obtenido. Existen varios métodos, entre los cuales los más conocidos son los de absorbancia y los defluorescencia. Los métodos de absorbancia se basan en que tanto el ADN como el ARN absorben luz UV con un pico máximo entre 250 y 270 nm, dependiendo de la cantidad relativa de cada una de las 4 basesnitrogenadas presentes. Se puede estimar la concentración de ADN en una muestra midiendo la absorbancia a 260 nm (DO260) con un espectrofotómetro. Por otro lado, las proteínas y otros contaminantestambién absorben luz UV pero con un máximo en 280 nm. Con el fin de evaluar la pureza de la muestra, se puede medir la DO280 y obtener la relación DO260 / DO280. Si ésta se encuentra entre 1,8 y 2, esprobable que la absorción sea causada por los ácidos nucleicos. Si su valor es inferior a 1,8 la muestra se encuentra contaminada. Los ácidos nucleicos no son fluorescentes por sí mismos, pero haysustancias, como el bromuro de etidio, que se intercala entre las bases del ADN y al ser irradiado con luz UV, fluoresce intensamente. Los fluorómetros permiten medir la cantidad de ADN presente en unamuestra que ha sido previamente tratada con bromuro de etidio. El método fluorométrico que utilizaremos en el práctico, consiste en someter una muestra de ADN a electroforesis sobre un gel de agarosa conbromuro de etidio, y comparar la intensidad de la señal fluorescente producida por ésta con un estándar de ADN de concentración conocida. La electroforesis tiene como objetivo separar los fragmentos deADN de diferente tamaño. Cuando el ADN genómico, de elevado peso molecular, corre sobre un gel de agarosa diluido (0,7%), se observa una señal intensa con una distancia de migración corta. Lafluorescencia de dicha banda se compara visualmente con la de los estándares de concentración conocida. Aquellas que posean igual intensidad poseerán la misma masa. Hoy en día, existen programas de...