biologo

ORAC

Con este ensayo se mide la degradación oxidativa de la FL al ser atacada por el radical AAPH. La solución stock de FL (4 μM) se realizó en tampón fosfato sódico 75 mM pH 7.4 y se conservó a-20ºC durante un máximo de 4 semanas. La solución de FL se preparó diariamente en tampón fosfato sódico 75 mM, pH 7.4, mediante una dilución de la disolución stock, a una concentración finalde 6 nM.
La concentración de la disolución stock de Trolox C utilizada para la elaboración de la recta patrón fue de 0.25 mM y se preparó en tampón fosfato sódico 75 mM pH 7.4. La concentración deflavonol fue de 15 μM, diluido en tampón fosfato sódico 75 mM, pH 7.4. El radical AAPH se preparó diariamente a una concentración 127 mM en tampón fosfato sódico 75 mM, pH 7.4. Las medidas decapacidad antioxidante por el método ORAC-FL se llevaron a cabo en un lector de placas Synergy-HT, Bio-Tek Instruments, Inc. (Winooski, EE.UU.), utilizando palcas de 96-pocillos de poliestireno con paredesnegras y fondo claro (Nalge Nunc International). La fluorescencia de las muestras se leyó por el fondo claro de la placa, usando una longitud de onda de excitación de 485/20 nm, y un filtro deemisión de 528/20 nm. El lector de placas fue controlado por el sofware KC4, versión 3.4. La capacidad de absorción del radical se determinó por el método descrito por Dávalos y col., en 2004, con ligerasmodificaciones. La reacción se llevó a cabo en tampón fosfato sódico 75 mM, pH 7.4, en un volumen final de 200 µL, compuesto por: 100 µL de solución de FL (con una concentración final de 3 nM), 0-70µL de solución de flavonol en ausencia y presencia de CDs, 30 µL de AAPH (con una concentración final de 19 mM) y el resto, hasta completar los 200 µL, tampón fosfato sódico 75 mM, pH 7.4. La mezcla dereactivos en ausencia del radical AAPH, se incubó durante 30 minutos a 37 ºC, dispensando inmediatamente después la solución del radical, usando para ello una pipeta multicanal. Seguidamente, la...