Biologo

Recuperación del ADN de geles de agrosa


El ADN a través de electroforesis en geles de agarosa se utiliza con frecuencia como una plantilla de primaria o de re-amplificación de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), así como de hibridaciones, la secuenciación, la ligadura, y muchas otras técnicas moleculares. To recover the DNA, the band of interest is excised with a sterile scalpeland the DNA extracted by various means. Para recuperar el ADN, la banda de interés se extirpa con un escalpelo estéril y el ADN extraído de distintas maneras. Common practices include organic extraction with phenol and chloroform, use of electroelution devices, `freeze and squeeze' methods, `crush and soak' methods and a few different spin techniques. Las prácticas comunes incluyen la extracciónorgánica con el uso de fenol y cloroformo, de los dispositivos de electroelución, congelar 'y apretar' métodos 'aplastar y absorber "los métodos y algunas técnicas diferentes spin.

Técnicas más usadas

The freeze and squeeze technique involves freezing the gel piece in liquid nitrogen within a micropipet tip [1] or centrifuge tube [2], and spinning out the liquid by centrifugation, while thecrush and soak method involves adding buffer to the agarose slice before squashing it with a glass rod. La técnica de congelación y la presión consiste en congelar la pieza de gel en nitrógeno líquido en una punta de micropipeta [1] o tubo de centrífuga [2], y girar el líquido por centrifugación, mientras que la aglomeración y disfrutar método consiste en la adición de buffer en el corte de agarosaantes de aplastar con una varilla de vidrio. The slurry is placed at 37 degrees C for several hours before the sample is centrifuged through siliconized glass wool or non-toxic polyallomer fibers. La lechada se coloca a 37 º C durante varias horas antes de la muestra se centrifuga a través de lana de vidrio siliconizado o no tóxicos fibras polyallomer.

Electroelution Electroelución
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An electrophoresis unit [3] or a mini-gel system can be used for DNA extraction by placing the gel fragments inside a dialysis bag along with electrophoresis buffer so that, when electroeluted, the trapped DNA can be recovered by precipitation. Una unidad de electroforesis [3] o un sistema de mini-gel puede ser utilizado para la extracción de ADN mediante la colocación de los fragmentos degel dentro de una bolsa de diálisis junto con tampón de electroforesis, para que, cuando electroeluye, el ADN atrapado pueden ser recuperados por las precipitaciones. This can also be accomplished by using a centrifuge tube mini-unit [4-7], or microtiter dish with capillary tubes that span two of the titer-dish wells. Esto también se puede lograr mediante el uso de un tubo de centrífugamini-unidad [4-7] plato, o microplacas con tubos capilares que abarcan dos de los pozos de títulos-plato.

Another way is to cut a small trough ahead of the migrating DNA band and to electrophoretically elute the DNA onto diethylaminoethyl (DEAE)-cellulose paper [8], dialysis tubing [9], affinity membrane [10] or into a dead space in the gel containing 0.3 M sodium acetate pH 6.0, 10 % sucrose [11]. Otraforma es a través de un corte pequeño por delante de la banda de ADN y la migración para eluir el ADN por electroforesis en dietilaminoetilo (DEAE)-celulosa de papel [8], tubos de diálisis [9], la membrana de afinidad [10] o en un espacio muerto en la gel que contiene sodio 0,3 M pH 6,0 acetato, 10% de sacarosa [11]. The problem with this method is that the gel must be visualized with UV andconstantly monitored to ensure collection of the sample. El problema con este método es que el gel se debe visualizar con UV y un seguimiento constante para garantizar la recogida de la muestra.

Resin binding Resina de unión
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A very popular method is to bind the DNA to silica particles by using commercially available binding resins, diatomaceous earth or glass fibers. Un método...