Biologo

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COMPONENTES Y ESTRUCTURAS DEL DNA





























Cultivo en superficie: Se toma un pequeño volumen (aproximadamente 50 μl) del cultivo con una micropipeta o con una pipeta Pasteur y se deposita sobre una placa que contiene el agarnecesario para el desarrollo del microorganismo de interés. Se esparce suavemente sobre esa superficie utilizando un rastrillo y se incuba en posición invertida para evitar que la humedad que se condense en la tapa caiga sobre las bacterias en crecimiento.
b) En el caso de la placa de Petri, tapar la placa. Identificar las placas marcándolas en la base e
incubar en posición invertida para evitarque el agua de condensación se deposite sobre la
superficie del agar, lo cual impediría la obtención de colonias aisladas.







ADN polimerasas intervienen en la replicación del ADN para dar a cada célula hija una copia del ADN original en el proceso de la mitosis, Llevan a cabo la síntesis de la nueva cadena deADN emparejando los desoxirribonucleótidos trifosfato (dNTP) conlos desoxirribonucleótidos complementarios correspondientes del ADN molde. Los dNTP que se usan en la replicación del ADN contienen tres fosfatos unidos al grupo hidroxilo 5' de la desoxirribosa y dependiendo de la base nitrogenada serán dATP, dTTP, dCTP o dGTP. La reacción fundamental es una transferencia de un grupo fosfato en la que el grupo 3'-OH actúa como nucleófilo en el extremo 3' de lacadena que está en crecimiento. El ataque nucleofílico se produce sobre el fosfato α (el más próximo a la desoxirribosa) del desoxirribonucleósido 5' trifosfato que entra, liberándose pirofosfato inorgánico y alargándose el ADN (al formarse un nuevo enlace fosfodiéster). A diferencia de la mayoría de procesos biológicos que ocurren en la célula en los que sólo se separa un grupo fosfato (Pi), durantela replicación se separan los dos últimos grupos fosfato, en forma de grupo pirofosfato (PPi)
Un partidor, cebador, iniciador o primer, es una cadena de ácido nucleico o de una molécula relacionada que sirve como punto de partida para la replicación del ADN. Es una secuencia corta de ácido nucleico que contiene un grupo 3'hidroxilo libre que forma pares de bases complementarios a una hebramolde y actúa como punto de inicio para la adición de nucleótidos con el fin de copiar la hebra molde.
3ª etapa. Corrección de errores

El enzima principal  en esta fase es la ADN polimerasa III, que corrige todos los errores cometidos en la replicación o duplicación. También intervienen otros enzimas como:

* Endonucleasas que cortan el segmento erróneo.
* ADN polimerasas I que rellenancorrectamente el hueco.
* ADN ligasas que unen los extremos corregidos
* Las Polimerasas de los eucariontes se denominan Polimerasa alfa, beta y gamma. La alfa es la responsable de la elongación de la cadena. La beta esta implicada en los procesos de reparación. La gamma es mitocondrial.
* En procariontes el proceso de síntesis de histonas ocurre concomitantemente con la síntesis de ADN.Componentes del complejo de duplicación
 
Primers (o cebadores)

Los “primers” o cebadores son pequeños segmentos de ARN que se utilizan para iniciar la síntesis de ADN.

Para crecer la cadena de ADN, la ADN polimerasa requiere del extremo 3´-OH terminar de un nucleótido, pero ¿cómo se inicia la síntesis de ADN?

El estudio cuidadoso de los fragmentos de Okazaki, revela que su extremo 5’consiste de segmentos de ARN que constan de 1 a 60 nucleótidos (lo cual depende de la especie) que son complementarios con la hebra de ADN. 

En Escherichia coli dos enzimas catalizan este proceso, la ARN polimerasa (es la enzima encargada de la transcripción) y la primasa (monómero de 60 kD) que fabrica los fragmentos de Okazaki. La ARN polimerasa es inhibida por rifampicina (inhibe la...