Biología molecular
Páginas: 2 (443 palabras)
Publicado: 11 de marzo de 2014
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una metodología estándar en cualquier laboratorio de biología molecular y consta fundamentalmente de 3 fases que se repiten un número de ciclos:DESNATURALIZACIÓN.
ALINEAMIENTO.
ELONGACIÓN.
Para realizar la técnica se necesitan:
Los 4 desoxirribonucleótidos-trifosfato (dNTP), sustratos para polimerizar nuevo ADN.
Dos cebadores oiniciadores (en inglés, primers), oligonucleótidos que son, cada uno, complementarios a una de las dos hebras del ADN. Son secuencias cortas, de entre seis y cuarenta nucleótidos, normalmente de dieciocho aveintidós, que permiten que la polimerasa inicie la reacción. Deben estar enfrentados y a no mucha distancia. Delimitan la zona de ADN a amplificar, es decir, corresponden a los nucleótidos que definenlos extremos de la secuencia que se desea replicar.
Iones divalentes. Se suele usar magnesio (Mg2+), agregado comúnmente como cloruro de magnesio (MgCl2), o algún otro catión divalente. También sepuede emplear manganeso (Mn2+), para mutagénesis de ADN mediante PCR, ya que altas concentraciones de Mn2+ incrementan la tasa de error durante la síntesis de ADN. Actúan como cofactores de lapolimerasa.
Iones monovalentes, como el potasio.
Una solución tampón o buffer que mantiene el pH adecuado para el funcionamiento de la ADN polimerasa.
ADN polimerasa o mezcla de distintas polimerasas contemperatura óptima alrededor de 70 °C (la más común es la polimerasa Taq).
ADN molde, que contiene la región de ADN que se va a amplificar.
Termociclador, el aparato que mantiene la temperaturanecesaria en cada una de las etapas que conforman un ciclo.
Los iniciadores de la PCR, también denominados cebadores o primers, son oligonucleótidos sintéticos que hibridan con la región,complementaria al ADN molde, que se desea amplificar y propician el inicio de la reacción de elongación por la Taq ADN polimerasa.
Ejercicios diseño de primers
1. Diseñe un par de primers para...
ALINEAMIENTO.
ELONGACIÓN.
Para realizar la técnica se necesitan:
Los 4 desoxirribonucleótidos-trifosfato (dNTP), sustratos para polimerizar nuevo ADN.
Dos cebadores oiniciadores (en inglés, primers), oligonucleótidos que son, cada uno, complementarios a una de las dos hebras del ADN. Son secuencias cortas, de entre seis y cuarenta nucleótidos, normalmente de dieciocho aveintidós, que permiten que la polimerasa inicie la reacción. Deben estar enfrentados y a no mucha distancia. Delimitan la zona de ADN a amplificar, es decir, corresponden a los nucleótidos que definenlos extremos de la secuencia que se desea replicar.
Iones divalentes. Se suele usar magnesio (Mg2+), agregado comúnmente como cloruro de magnesio (MgCl2), o algún otro catión divalente. También sepuede emplear manganeso (Mn2+), para mutagénesis de ADN mediante PCR, ya que altas concentraciones de Mn2+ incrementan la tasa de error durante la síntesis de ADN. Actúan como cofactores de lapolimerasa.
Iones monovalentes, como el potasio.
Una solución tampón o buffer que mantiene el pH adecuado para el funcionamiento de la ADN polimerasa.
ADN polimerasa o mezcla de distintas polimerasas contemperatura óptima alrededor de 70 °C (la más común es la polimerasa Taq).
ADN molde, que contiene la región de ADN que se va a amplificar.
Termociclador, el aparato que mantiene la temperaturanecesaria en cada una de las etapas que conforman un ciclo.
Los iniciadores de la PCR, también denominados cebadores o primers, son oligonucleótidos sintéticos que hibridan con la región,complementaria al ADN molde, que se desea amplificar y propician el inicio de la reacción de elongación por la Taq ADN polimerasa.
Ejercicios diseño de primers
1. Diseñe un par de primers para...
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