Biología

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES IZTACALA
BIOLOGÍA
1355
BIOLOGÍA CELULAR Y BIOQUÍMICA
PRÁCTICA II: “Transporte de glucosa y bombeo de protones en Saccharomyces cerevisiae”

EQUIPO 1
Capistrán Cervantes Ángel Erick
Enriquez Maldonado Daniel
Garduño Dimas Samantha
Mancilla Jiménez Claudia Italia
Pérez Lozano Laura Gabriela

PROFESORAS:

LlaraíCarolina Gaviria González
María Teresa Ortiz Melo


Los Reyes Iztacala, Tlalnepantla Edo. De Méx., Septiembre de 2012
INTRODUCCIÓN
La glucosa, que es una hexosa, constituye la fuente primaria de energía para la célula (Robertis, 1995), este es el principal monosacárido en la naturaleza que proporciona energía a las células de una amplia gama de organismos, que va desde los más simplescomo la levadura hasta los más complejos como el ser humano (Castrejón, el al. 2007).
El transporte de la glucosa a través de la membrana celular se lleva a cabo por dos familias de proteínas de membrana: los transportadores de glucosa acoplados a sodio (SGLT) y las proteínas facilitadoras del transporte de glucosa (GLUT). Los primeros se expresan principalmente en epitelios que se encargan de laabsorción y de la reabsorción de nutrientes, esto es, el epitelio del intestino delgado y el epitelio tubular renal respectivamente. Los GLUT se expresan en todas las células del organismo y permiten mover la glucosa de un compartimiento a otro (Castrejón, el al. 2007).
La levadura Saccharomyces cerevisiae es un hongo ascomiceto. Este microrganismo muestra 5 fases de crecimiento bien definidascuando es cultivado en medios líquidos con glucosa como fuente de carbono: la fase lag, la fase logarítmica, el cambio diáuxico, la fase postdiáuxica y la fase estacionaria. La fase lag es un periodo de adaptación en el cual la célula se prepara para dividirse. Durante la fase logarítmica las células alcanzan su máxima velocidad de duplicación y llevan a cabo un metabolismo fermentativo del que seproduce etanol. Al disminuir la concentración de glucosa, las células atraviesan por elcambio diáuxico, un periodo breve de tiempo en el cual no hay división, y la célula cambia de un metabolismo fermentativo a uno respiratorio. En la fase postdiáuxica las célulasusan como fuente de carbono el etanol producido durante la fase logarítmica e incrementan su resistencia al estrés gradualmente; en tantoque la fase estacionaria se presenta cuando los nutrientes del medio se han agotado y no hay división celular. En esta fase, las células acumulan carbohidratos de reserva como trehalosa y glucógeno, alcanzan el máximo nivel de resistencia a estrés y su pared celular se vuelve más gruesa y resistente a la digestión por liticasa (Mallol, et al. 2004)
En la levadura S. cerevisiae, la ATPasa deprotones de la membrana plasmática está codificada por el gen esencial PMA1. Esta ATPasa supone más del 50 % del total de proteínas de la membrana plasmática, y su actividad está regulada por el pH y por la disponibilidad de fuentes de carbono (Pérez, 2009).

OBJETIVOS

* Determinar por un método colorimétrico el transporte de glucosa en S. cerevisiae.
* Establecer la relación existenteentre el consumo de glucosa y la actividad de la H+-ATPasa membranal.
* Observar el efecto de un inhibidor de la síntesis de ATP mitocondrial sobre la actividad de la H+-ATPasa membranal.

METODOLOGÍA

Para la actividad de Hᶧ -ATPasa se inició diluyendo 1.0 ml de suspensión de levadura en 19 mL de agua destilada, se mantuvo en agitación constante con ayuda de un agitador magnético y unaparrilla, posteriormente se colocó el electrodo del potenciómetro en la muestra y se prosiguió a colocar 1.5 mL. de glucosa al 10% e inmediatamente se comenzó a tomar la lectura del pH al tiempo 0 , 1.5 , 3 y así cada 3 minutos hasta llegar a 36; al mismo tiempo en que se leyó el pH se sacaron muestras de 500 μL de la suspensión para obtener varias alícuotas que se centrifugaron a 14,000 rpm...