bioprocesos sacharomyces

PREINFORME N° 03
BIOCATÁLISIS ENZIMÁTICA
I. OBJETIVOS:
I.1 OBJETIVOS GENERALES

1. Diseñar y realizar diferentes experiencias de estudios cinéticos de un preparado enzimático en bruto delevadura de panificación (B-D-fructofuranidasa) en sus formas soluble e inmovilizada.


I.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

1. Preparación de los reactivos y la obtención de curvas de calibrado deproteínas y azucares reductores.
2. Obtención del preparado enzimático en bruto de invertasa de levadura.
3. Determinación del rango de linealidad y actividad enzimática (actividades volumétrica y soluble)del preparado soluble.
4. Determinar los parámetros cinéticos de la invertasa soluble.
5. Inmovilizar invertasa en geles.
6. Diseñar y montar el sistema minireactor con invertasa inmovilizada, paradeterminar los parámetros cinéticos de la enzima.
7. Analizar el comportamiento de la enzima inmovilizada.



II. METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
Consideraciones:
Usar soluciones concentradas desacarosa: 0.2 M – 0.6 M
Utilizar como soporte Alginato de sodio al 1.5%-2.5% (p/v)
Usar un sistema mini-reactor enzimático por lotes agitado.
Definición: una unidad internacional de Invertasa esaquella cantidad de enzima necesaria, que libera un micromol (1 µmol) de azucares reductores por minuto, desde una solución de 20g/L a 40º C y pH 4.7 (Tampón acetato de sodio 0.05 M)
1) DETERMINACION DEPROTEINAS POR EL METODO BRADFORD

Agregar en un tubo de ensayo 500 μL de muestra convenientemente diluida.
Añadir 05 ml de reactivo Bradford a cada muestra y dejar reposar durante 05 minutos.
Leerla absorbancia a una longitud de onda de 595 nm, contrastándola con un blanco de agua destilada de 500 μL.
La concentración se obtiene interceptando la medida de absorbancia en la curva de calibrado.2) MÉTODO DE INMOVILIZACIÓN DE INVERTASA EN ALGINATO DE SODIO
El método de inmovilización es por unión química. Se debe procurar que la inmovilización incremente la afinidad por el sustrato,...