bioq

39

2. MATERIAL Y MÉTODOS

Material y métodos 41

2.1 CEPAS BACTERIANAS Y PLÁSMIDOS
Las cepas bacterianas utilizadas en este trabajo se detallan en las tablas 2.1.1 y
2.1.2, en su mayoría pertenecientes a Salmonella enterica serovar Typhimurium:
Tabla 2.1.1 Cepas bacterianas de Salmonella enterica serovar Typhimurium utilizadas en
este trabajo.
Cepas

Genotipo relevanteReferencia/Origen

LT2

cepa salvaje

Lilleengen, 1948

TT1704

∆his-9533

Torreblanca y Casadesús, 1996

SV3081

pSLT - (isogénica de LT2)

Torreblanca et al., 1999

YFER

TT1704 yfeR::MudJ

Prenafeta, 1999

YFER2

TT1704 yfeR-

Este trabajo

YFERYGDP TT1704 yfeR::MudJ ygdP::Tn10dCam Prenafeta, 1999
YGDP

TT1704 ygdP::Tn10dCam

Polo, 2000

C52

∆rpoS::camKowarz et al., 1994

TTRPOS

TT1704 ∆rpoS::cam

Este trabajo

YFEH

TT1704 yfeH-

Este trabajo

14028

cepa salvaje

ATCC

SV4280

lrp-

J. Casadesús

Tabla 2.1.2 Cepas de Escherichia coli utilizadas en este trabajo.
Cepas

Genotipo relevante

Referencia

HB101

supE44, supF58, hsdS3(rB-mB-), recA13, ara-

Sambroock et al., 1989

14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20,xyl-5, mtl-1
BL21(DE3) pLysE; hsdS, gal, lcIts857, ind1, Sam7, Nin5,
lacUV5-T7gene1

Studier y Moffatt, 1986

Material y métodos 42

A continuación se describen las características de los plásmidos (tabla 2.1.3) y
bacteriófagos (tabla 2.1.4) utilizados en este trabajo:
Tabla 2.1.3 Plásmidos utilizados en la realización de este trabajo.
Plásmido

Descripición

Referencia

pBR322oripMB1; Apr, Tcr

Bolívar et al., 1977

pLG338-30

oripSC101; Apr

Cunningham et al., 1993

pUC19

r

oriColE1; Ap

Yanisch-Perron et al.,
1985

pMC391

lacZ'

Casadaban et al., 1980

pKD46

oriR101, repA101 (ts), araBp-gam-bet-exo
(Red helper plasmid, Ts; Apr)

Datsenko y Wanner,
2000

pKD4

oriRγ; Kmr, Apr

pCP20

λcI857 (ts), ts-rep
(Recombinasa FLP,Ts)

Datsenko y Wanner,
2000
Cheperanov y
Wackernagel, 1995

pET3b

Promotor de T7, Apr

Studier et al.,1990

pETYFER

pET3b + yfeR, Apr

Este trabajo

pETYFERr

pET3b + cadena complementaria al ARNm

Este trabajo

de yfeR, Apr
pANN202-312

pACYC184 + hlyC, hlyA, hlyB,hlyD; Cmr

Godessart et al.,1988

pLGYFER

pLG338-30 + yfeR, Apr

Este trabajo
r

pLGYFEHLACpLG338-30 + yfeH::lacZ, Ap

Este trabajo

pLGYFEHCAT pLG338-30 + yfeH::CAT, Apr

Este trabajo

pLACP

pLA2917 +yfeR, Tcr; Knr

Polo, 2000

pUCIR

pUC19 + yfeH + región intergénica yfeR-

Este trabajo

yfeH + extremo 5’ MudJ
pKO3

Cmr, repA (ts), sacB

Link et al., 1997

pKYFEH

pKO3 + yfeH mutado

Este trabajo

Tabla 2.1.4 Bacteriófagos utilizados en experimentos detransducción generalizada.
Bacteriófago

Descripción

Referencia

P22 HT int4

int4

Schmieger, 1972

P22 H5

c2

Torreblanca y Casadesús, 1996

Material y métodos 43

2.2 MEDIOS DE CULTIVO Y ANTIBIÓTICOS
2.2.1 MEDIOS DE CULTIVO
Se utilizaron diferentes medios de cultivo líquidos y sólidos, cuya composición y
preparación se detallan a continuación:
•

LB(Luria-Bertani; Sambrook et al., 1989): medio de cultivo líquido utilizado de

forma habitual para el crecimiento bacteriano. En algunos experimentos se modificó la
osmolaridad del medio cambiando la concentración de NaCl. Si en condiciones normales
la molaridad del NaCl es de 170 mM se aumentó a 0.5 M (29.22g/l) o bien se disminuyó a
0 M.
LB
Peptona trípsica de caseína (Schärlau Microbiology)

10Extracto de levadura (Schärlau Microbiology)

5

NaCl (Panreac)
•

g/l

10

LB agar: es el medio de cultivo sólido utilizado de forma habitual y consiste en

añadir 15 g/l de agar para bacteriología (Schärlau Microbiology) al medio LB arriba
especificado.
•

LB agar blando: medio de cultivo semisólido utilizado para la titulación de

lisados fágicos al permitir el crecimiento...