Bioquímico Farmacéutico

Informe
 de
 laboratorio:
 descongelación,
 subcultivo
 de
 líneas
 
celulares
 estudio
 morfológico
 y
 del
 índice
 de
 división
 mitótica.
 
Sandra
 Cuenca
 Camacho,
 Patricio
 Rodríguez
 Estéfano,
 Deyfa
 Sutherland
 Nelson.
 

Resultados
Después de dos horas de haber descongelado las células y añadido seprocedió a observar las células en el microscopio, cuando estas fueron
vistas en el lente de 40X (figura 1.1) se evidenciaron células
redondeada con una confluencia del 5%, en el cual no se evidenció
contaminación, por medio de la cámara de Neubauer no se vieron
células muertas, con un conteo final de 478500 células por medio

de la siguiente formula:
 

#𝑐𝑒𝑙 =

#𝑐𝑒𝑙  𝑐𝑜𝑛𝑡
𝑥10000𝑥𝑓𝑑
#𝐶𝑢𝑎𝑑siendo:

Figura
  1.1.
  Células
  descongeladas
  observadas
 
en
  el
  lente
  de
  40x
  después
  de
  2
  horas
  de
 
incubación.

# cel cont: células contadas
#Cuad: numero de cuadrantes vistos
fd: Factor de dilución.

Luego de 24 horas de incubación se volvieron a observar las células en
el microscopio esta vez se tuvo un 30% deconfluencia. No se evidenció
contaminación alguna, sin muerte celular aparente. A las 48 horas
después de la adición de tripsina de la confluencia aumentó a 70% con
células redondeadas, con ligeras irregularidades en su morfología. Se
obtuvo un conteo celular de 295000 células/ml.

Al realizar el subcultivo tras la tripsinización este se efectuó
mediante la adición de 1694,9microlitros desuspensión celular y
en la cual se calcularon 5x105 sabiendo con anterioridad que por
medio del conteo con la cámara de Neubauer se determinaron 295000
células/ml, se realizó la siguiente relación:

Figura
 2
 células
 tripsinizadas
 después
 de
 48
 
horas
 de
 incubación

295000 células à 1000µl
500000 células à x µl
En resumen se estudiaron los parámetros quese muestran a continuación :
Tabla 1 Características del cultivo durante la experimentación

Estado de confluencia
Aspecto morfológico

0 horas
5%
Redondeada

24 horas
30%
Ligeramente
irregular

48 horas
70%
Irregular

Contaminación

No

No

No

72 horas
80-85%
Alargada/
morfología
normal
No

Además se analizó el medio conforme pasaban los días obteniéndose unmedio de color rosado claro, consistencia
líquida y realizando un monitoreo del ph por el color del mismo. A continuación se muestra una tabla en donde se
evidencian los parámetros del cultivo en distintos momentos del estudio.

Tabla 2 Evaluación de las condiciones del medio de cultivo y el pH

Evento

Color del medio

pH

Al atemperar el medio

Durazno

6,6- 7,2

Al cambiar elmedio a las 2 horas

Rosado Palido

7,2-7,5

El momento que adicionó la tripsina.

Rosado Palido

7,2-7,5

Antes de adicionar la colcemida

Rosado Palido

7,2-7,5

La medición del ph se realizó por medio del viraje del medio sabiendo que si este no cambiase de color, significa que el
ph se mantendría en el rango citado anteriormente. El fabricante del medio nos establece que elph inicial del medio es
de 6,6 ± 0,5 a 7,2± 0,5. (Cellgro), debido a un incremento en la osmolariodad por la adición celular aumenta por ende el
ph ligeramente siendo este de 7,2 a 7,5
Tripsinización
Antes

Después

1
 

1
 

2
 

Figura
 3
 Células
 sin
 tripsina,
 se
 puede
 
observar
 que
 las
 mismas
 se
 encuentran
 
ancladas a
 la
 superficie
 1,
 mientras
 
 que
 
existen
 pocas
 células
 redondeadas
 
flotando2.

Figura
 4
 Células
 tripsinizadas.
 Se
 puede
 
observar
 que
 las
 células
 se
 desligan
 del
 
sustrato
 y
 se
 encuentran
 flotando
 en
 él.

Adición de colcemida: luego de la tripsina se procede a llevar...