Bioqui Fotometria

INFORME DE LA PRÁCTICA N°3

Nombre del Alumno: Jackeline Pamela Meza Paredes
Grupo: 2-1 Fecha: 11/04/2012

1. Usando los valores de la actividad enzimática obtenidos. Graficar:

Experimento #1: Efecto del pH

TUBO Nro. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | B |
PH | 1.0 | 1.5 | 6.0 | 9.5 | 11.5 | | |
Albúmina : ml | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0| 5.0 | | 5.0 |
HCl 1N : ml | 2.0 | 0.5 | | | | | |
CO3Na2 10% : ml | | | | 0.5 | 2.0 | | |
Agua dest. : ml | | 1.5 | 2.0 | 1.5 | | | 5.0 |
Pepsina 1% : ml | | | | | | 20 | |

Primero se procede a preparar los cinco primeros tubos agregándole la pepsina. Y luego se obtiene el D.O. gracias al espectrofotómetro.

* Tubo 1 ===> 0.334
* Tubo 2 ===>1.041
* Tubo 3 ===> 1.376
* Tubo 4 ===> 1.310
* Tubo 5 ===> 1.136

* Tubo blanco ===> 1.334

Ahora se resta el D.O del tubo blanco menos el D.O. de cada uno de los 5 tubos y obtenemos la actividad enzimática.

* Tubo 1 ===> 1.334 - 0.334 = 1.000
* Tubo 2 ===> 1.334 - 1.041 = 0.293
* Tubo 3 ===> 1.334 - 1.376 = 0.042
* Tubo 4 ===>1.334 - 1.310 = 0.024
* Tubo 5 ===> 1.334 - 1.336 = 0.002

En esta gráfica se observa que las enzimas tienen un pH óptimo para trabajar y una vez pasado ese pH su actividad catalítica empieza a disminuir

En esta gráfica se observa que las enzimas tienen un pH óptimo para trabajar y una vez pasado ese pH su actividad catalítica empieza a disminuir

1

0.9

0.8

0.7

0.60.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
1

0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0

Experimento #2: Efecto de la concentración de la enzima

TUBO Nro. | B | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Albúmina : ml | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | |
HCl 1N : ml | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | |
Agua dest. : ml | 4.5 | 4.0 | 3.5 | 2.5 | 1.5 | |
Pepsina 1% : ml | | || | | 10.0 |

TUBO Nro.1 | B | 1 | 2 | 3 | 4 |
Pepsina incubada | 0.0 | 0.5 | 1.0 | 2.0 | 3.0 |

Se preparan los cuatro tubos agregando la pepsina en diferentes concentraciones y exponiéndolos a temperatura, para luego obtener la absorbancia con ayuda del espectrofotómetro.

* Tubo 1 ===> 0.128
* Tubo 2 ===> 0.180
* Tubo 3 ===> 0.070
* Tubo 4 ===> 0.056* Tubo blanco ===> 0.464

Ahora se resta al D.O. del tubo blanco el D.O. de cada tubo y obtenemos la actividad enzimática.

* Tubo 1 ===> 0.464 - 0.128 = 0.336
* Tubo 2 ===> 0.464 - 0.180 = 0.366
* Tubo 3 ===> 0.464 - 0.070 = 0.394
* Tubo 4 ===> 0.464 - 0.056 = 0.408

En esta gráfica se ha tratado de demostrar como la actividad catalítica de una enzima esdirectamente proporcional a su concentración.

En esta gráfica se ha tratado de demostrar como la actividad catalítica de una enzima es directamente proporcional a su concentración.

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0

1 2 3
1 2 3

Experimento #3: Efecto de la temperatura

Serie Nº 1

TUBONro.(1° serie) | 1a | 2a | 3a | 4a | 5ª | Blanco |
Albúmina : ml | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 |
HCl 1N : ml | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | - |
Agua dest. : ml | 3.5 | 3.5 | 3.5 | 3.5 | 3.5 | 4.0 |

Serie Nº 2

TUBO Nro.(2° serie) | 1b | 2b | 3b | 4b | 5b |
Pepsina 1% : ml | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |

Incubación

TUBO Nro. | 1a-1b | 2a-2b | 3a-3b | 4a-4b | 5a |5b |
T°.C° | 0°C | T°amb | 37° | 70° | 37° | 100° |

Se lleva a cabo la preparación de las muestras a medir. Se incuban las enzimas a diferentes temperaturas y luego se mezclan con el sustrato. Posteriormente se mide la absorbancia de cada muestra.

* Tubo 1 ===> 0.288
* Tubo 2 ===> 0.087
* Tubo 3 ===> 0.071
* Tubo 4 ===> 0.242
* Tubo 5 ===> 0.342

*...