Bioquimica 2

ESTRUCTURA DE AMINOÁCIDOS Y PRECIPITACIÓN DE CASEÍNA

Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira
Departamento de ciencias básicas
Bioquímica



OBJETIVOS

Discutir las características estructurales de lo aminoácidos, el concepto de pH o punto isoeléctrico, mediante la precipitación de la caseína.

Verificar diferentes componentes de la precipitación como: las proteínas, delactosa, presencia de calcio.


Aprender las composiciones químicas de los aminoácidos que están presentes en productos comunes y sus diferentes usos.



PROCEDIMIENTO

PRECIPITACIÓN DE CASEÍNA.
a) En un vaso de precipitados agregamos 80 ml de leche, la calentamos a aproximadamente 40 ºC;
b) Adicionamos gotas de ácido acético agitando lenta y frecuentemente hasta conseguir un pH de 4.7midiéndolo con el pH-metro :
No. Gotas
0
10
20
30
40
50
60
70
80
pH
6.74
6.54
6.27
6
5.79
5.51
5.12
4.98
4.70


c) Se filtró el suero con papel filtro, para separarlo de la caseína (color beige), a continuación se presionó suavemente la caseína para retirar el exceso de suero.
d) Pesamos la caseína con una balanza electrónica, el resultado es 10,20 g en 80 ml de leche.
e) Seexpuso el suero a luz ultravioleta de onda corta donde no hubo un cambio de color muy vistoso , luego se expuso a una de onda larga donde tuvo un color verde fluorescente ya que el contenido de flavina posee anillos en su estructura que absorben la luz y hace que le de este color. Es la misma vitamina B2.

Figura 1. Izquierda: exposición a onda corta – derecha: exposición a onda larga.

Lascausas de error pueden ser por:

-Falta de precisión a la hora de adicionar el acido acético 2M.

-El peso pudo variar por la forma del filtrado y el cómo se seco el precipitado antes de pesar la muestra.

¿Con un litro de leche cuantos gramos de caseína se consiguen?

ml de leche
caseína(g)
80
10.20
1000
XX = 1000 x 10.20 / 80
X = 127.5 g.
VERIFICACIÓN DE PRESENCIA DE PROTEÍNAS.

a) A un tubo de ensayo se agrego 3 ml de suero de leche y una pequeña porción de caseína.
b) En otro tubo de ensayo se agrego una pequeña Porción de caseína y 2 ml deagua
c) Los dos tubos de ensayo se ponen al baño maría 2 min y luego se les agrega a cada uno 1 ml de reactivo de Biuret (azul).

RESULTADO:
1° Tubo (Agua + caseína): Color violeta claro. La poca coloración denota que el suero todavía cuenta con otras proteínas.
2° Tubo (Suero + caseína): un color violeta con precipitación de la caseína. El color violeta denota la presencia de proteína. Elreactivo de Biuret compuesto por Cu y NaOH se une a la lámina de la caseína. El cobre es atraído por los nitrógenos del enlace peptídico formando el color violeta.

DETERMINACION DE PRESENCIA DE CARBOHIDRATOS (LACTOSA).
a) A un tubo de ensayo se le agregó 1 ml de suero de leche, se le adicionó 1 ml de reactivo de Benedict y se calentó al baño maría. .
RESULTADO:






Figura 2.Mezcla(suero de leche+ reactivo Benedict).

El color amarillo ladrillo nos dice que el resultado fue positivo, es decir que en el suero hay presencia de carbohidratos.


DETERMINACION DE LA PRESENCIA DE CALCIO.
En un tubo de ensayo se agrega 1 ml de suero de leche, se añaden 3 gotas de Oxalato de disolución Amonio al 4 % y se observa.
RESULTADO:

Figura 3. (Suero de leche + oxalato deamonio).

Al reaccionar, el Oxalato y el Amonio se separan. El oxalato con carga negativa (-), es atraído por el calcio de carga positiva (+) y se precipita tomando un color blanco. Por su parte, el amonio queda suspendido en la solución con una carga positiva (+).


DISCUSIÓN

2. ¿Cómo pueden clasificarse los aminoácidos? Examine las características comunes de cada grupo. Compare los...