bioquimica cromatografia

INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

CQU-310











Cromatografía de Exclusión Molecular
(cromatografía de filtración en gel)













Integrantes:

Natalia Méndez
Jocelyn Ramírez
Solange Valenzuela

Sección:

310-301

Nombre profesores:

Cristian Muñoz
Cristian Moscoso



Introducción

Existen varios tipos de separación de componentesde una mezcla en bioquímica. La separación de estas moléculas biológicas se basa en las propiedades físicas y químicas de sus componentes, como por ejemplo tamaño, masa o afinidad por otras moléculas.
El método de separación de proteínas más utilizado en bioquímica es la cromatografía, también existe la diálisis que se utiliza en pacientes con alguna falla metabólica y la electroforesis, acontinuación una breve reseña de cada una:

Diálisis:
Es el proceso de separar las moléculas en una solución por la diferencia en sus índices de difusión o presión osmótica a través de una membrana semipermeable. La diálisis es una técnica común de laboratorio, y funciona con el mismo principio que diálisis médica. Típicamente una solución de varios tipos de moléculas es puesta en un bolsosemipermeable de diálisis, como por ejemplo, en una membrana de la celulosa con poros, y el bolso es sellado. El bolso de diálisis sellado se coloca en un envase con una solución diferente, o agua pura. Las moléculas lo suficientemente pequeñas como para pasar a través de los poros (a menudo agua, sales y otras moléculas pequeñas) tienden a moverse hacia adentro o hacia afuera del bolso de diálisis en ladirección de la concentración más baja. Moléculas más grandes (a menudo proteínas, ADN, o polisacáridos) que tiene dimensiones significativamente mayores que el diámetro del poro son retenidas dentro del bolso de diálisis. Una razón común de usar esta técnica puede ser para quitar la sal de una solución de la proteína. La técnica no distinguirá efectivamente entre proteínas.(1)
Electroforesis:Técnica analítica de separación de biomolecular, que se basa en la migración de moléculas cargadas, a través de una matriz o soporte por acción de un campo eléctrico, la movilidad electroforética está dada por la carga, el tamaño y la forma de la misma, la carga y el tamaño son directamente proporcionales, y migra más rápido por el campo eléctrico. Existen 2 tipos de electroforesis:

Electroforesisen papel: se utiliza para separar mezcla de moléculas pequeñas, el soporte a utilizar es un papel filtro
Electroforesis en gel: utilizado para separar moléculas de gran peso molecular, soporte a utilizar, un gel semisólido y poroso.(2)






Cromatografía:
Es una técnica basada en la diferente velocidad que se mueven los solutos arrastrados por un disolvente (Fase móvil) a través de unmedio poroso
(Fase estacionaria).
Existen varios tipos de cromatografía, las que se mencionan en la guía de estudio previa al laboratorio son:

Cromatografía de intercambio iónico:
Está basada en la atracción de los iones de soluto y los centros unidos a la fase estacionaria. Los grupos cargados positivamente en la fase estacionaria atraen a los aniones del soluto, la velocidad de intercambioiónico depende de la afinidad, concentración iónica, el pH y sus cargas netas.


Cromatografía de afinidad:
Es específica, se separa por propiedades biológicas funcionales y no por propiedades físicas o químicas.


Cromatografía de adsorción:
Permite la separación de una mezcla de solutos basándose en la diferencia de velocidad con que estos se mueven a través de la fase estacionaria activa(silica gel o alúmina). La adsorción depende de la interacción del soluto con la fase estacionaria (interacción puente hidrogeno, dipolo-dipolo, etc.).

Se representa con una formula
RF= Distancia recorrida por el soluto / la distancia recorrida por la fase móvil.


Cromatografía de Exclusión Molecular
(Cromatografía de filtración en gel):
Método que a menudo se utiliza para la...