bioquimica lab 1

 Resultados:
Simbología:
BIUR= Biuret
BRAD= Bradford
MP BI= Muestra problema biuret
MP BR= Muestra problema Bradford
100= stock 100 µg/mL (Bradford)
10= stock 10 mg/mL (Biuret)

Método de Biuret:

Tabla N°1
Tubo
Proteína (mg/mL)
Volumen del stock (µl)
Volumen de H2O (µl)
Volumen del Biuret (mL)
Vf (mL)
Absorbancia 540nm
1
2
200
800
4
5
0,102
2
4
400
600
4
5
0,211
3
6
600
400
4
5
0,333
4
8800
200
4
5
0,464
5
10
1000
0
4
5
0,601
6 Blanco
0
-
1000
4
5
0
7 MP
X
300*
700
4
5
0,007
300*: son los 300µl de la MP ≠ µl stock
Tiempo desarrollo color: 30 min
Calculo para sacar los mL de stock que debe añadirse.

Ejemplo para el tubo 1:
Concentración de la solución stock de albumina: 10 mg/mL
Volumen final: 1mL













Grafico N°1: Absorbancia v/s Concentración de proteína

Determinaciónde la MP
Sabiendo que la Abs. de la Muestra Problema es de 0,007 y teniendo en cuenta la regresión lineal “y = 0,0626x-0,0331”; y= 0,007





La Concentración de la muestra problema es de 0,640 mg/mL.

Método de Bradford:

Tabla N°2:
Tubo
Proteina (µg/mL)
Volumen del stock (µl)
Volumen del H2O (µl)
Volumen del Bradford (µl)
Vf (µl)
Absorbancia 595 nm
A
5
40
760
200
1000
0,420
B
10
80
720
2001000
0,600
C
15
120
680
200
1000
0,300
D
20
160
640
200
1000
0,621
E
25
200
600
200
1000
0,563
F
30
240
560
200
1000
0,578
G (blanco)
0
-
800
200
1000
0
H (MP)
x
100*
700
200
1000
0,515
100*: son los 100µl de la MP ≠ µl de stock
Tiempo desarrollo color: 10min
Calculo para sacar los µl de stock que debe añadirse

Ejemplo para el tubo A :
Concentración de la solución stock de albumina: 100 µg/mLVolumen final: 800 µl




Grafico N°2: Absorbancia v/s Concentración de proteína


Grafico N°3: Absorbancia v/s Concentración de proteína (con datos coherentes para que de una línea recta)

Determinación de la MP
Sabiendo que la Abs. de la muestra problema es de 0,515 y teniendo en cuenta la regresión lineal del grafico N° “y = 0,0066x + 0,3892” ; y= 0,515





La concentración de la muestra problemaes de 19,06 µg/mL.
































Introducción:
Las proteínas son moléculas esenciales para el correcto funcionamiento de nuestro organismo. Esto es debido a que las proteínas, son el elemento básico de construcción de los tejidos que forman nuestro cuerpo y además, regulan numerosas funciones vitales. Aquí veremos la definición de proteína y su composición. También veremos porqué son importantes las proteínas, sus propiedades y el origen de la palabra y las primeras investigaciones sobre las proteínas.
Los aminoácidos son las unidades químicas o elementos constitutivos de las proteínas que a diferencia de los demás nutrientes contienen nitrógeno.
Los aminoácidos son biomoléculas formadas por (C) Carbono, (H) Hidrogeno, (O) Oxígeno y (S) Azufre.
Estos, son la únicafuente aprovechable de nitrógeno para el ser humano, además son elementos fundamentales para la síntesis de las proteínas, y son precursores de otros compuestos nitrogenados.
El método de Biuret se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptidicos en medio básico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH. La intensidad de coloración es directamente proporcional ala cantidad de proteínas (enlaces peptídicos) y la reacción es bastante específica, de manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo en suero).
El metodo de Bradford se basa en la unión de un colorante, Comassie Blue G-250 (también Serva Blue) a las proteínas. Elcolorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15 µg), simple, rápido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinación. Entre las sustancias que interfieren estánlos detergentes y las...