Bioquimica Pesquera

Facultad de Pesquería


Curso:
Bioquímica Pesquera

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Tema: Actividad de fosfatasa acida en hígado de pollo y pescado

Fecha de entrega:
Fundamento
Fosfatasa ácida (AcP) es el nombre dado a todas las fosfatasas que tienen actividad óptima por debajo de un pH de 7.0. La presencia de fosfatasa ácida en suero provienede varias fuentes que incluyen: los riñones, el hígado, el bazo, los eritrocitos, las plaquetas y la glándula prostática. Cada uno de éstos contribuye con isoenzimas de fosfatasa ácida que son específicas del órgano o células de origen.
Se utiliza Para Nitrofenol Fosfato como sustrato, ya que el producto de la hidrólisis es fácilmente cuantificable, se utilizara un extracto de hígado como fuentede enzima.
En la actividad de fosfatasa, inicialmente se observa la liberación de paranitrofenol y fosfato inorgánico. La segunda parte ilustra la forma de detectar el paranitrofenol formado. Al añadir NaOH para detener la reacción, el hidróxido reacciona con el paranitrofenol para remover el protón fenolito y se genera paranitrofenolato, el cual absorbe a un λ=402 nm.
El nivel de hidrólisises proporcional a la actividad presente de la enzima en el extracto de hígado. La actividad de la enzima se expresa en unidades de enzima (UE). Se considera una unidad de enzima a la cantidad de enzima necesaria para producir una micromol de producto por minuto, bajo las condiciones del ensayo

Revisión de literatura
Considérese los cambios que ocurre cuando la radiación monocromática pasa através de la celda de absorción mostrada en la figura. Primero se pone la celda con el blanco el cual consiste del solvente, más otros constituyentes a parte de las principales especies absorbentes. El haz trasmitido por el blanco representa la radiación incidente menos las pérdidas por dispersión, reflexión, etc.

Proceso de absorción de radiación electromagnética en una celda que contiene unao más especies absorbentes

El poder radiante que se obtiene a la salida de la celda con el blanco se le llama Io representa al haz incidente cuando el blanco es reemplazado por la muestra.
Al pasar la radiación a través de un segmento de sección transversal A en la muestra que contiene la muestra absorbente. -dI representa la pérdida de poder radiante al atravesar el haz una capa de espesorinfinitesimal db; esto es, -dI es la cantidad de radiación que ha sido absorbida por ésta capa. Dado que la absorción de la energía requiere de la interacción entre un fotón y la especie absorbente, el número de posibles colisiones que ocurren en la capa db es directamente proporcional a el número de especies absorbentes que se encuentran en ésta, y al número de fotones que la atraviesan.COEFICIENTE DE ABSORTIVIDAD MOLAR.- El término es llamado coeficiente de absortividad molar, cuando la concentración de la solución de lectura se expresa es moles/lto. Si la concentración de la especie absorbente se expresa en: ppm, mgrs/lto, grs/lto, grs/ml., o cualesquier otro sistema de unidades de concentración, al coeficiente se le llama coeficiente de absortividad específica y se representa porla letra a, en cuyo caso A=abC.
Por lo tanto, la concentración de la solución no necesariamente debe estar expresada en moles/lto. para que la Ley de Beer sea válida, y puede utilizarse cualesquier otro sistema de unidades pero siempre deberán especificarse las unidades del coeficiente de absortividad.
La relación It/Io se define como transmitancia y se representa por la letra T. Esto es: -log(It/Io)= -log T = bC ó -log T = bC
Es muy útil definir el término absorbancia A, el cual es definido como igual a logaritmo decimal inverso de la transmitancia: -log T = A = Absorbancia A=bC
El valor de (o a, según sea el caso), es característico del ion o molécula en un solvente específico a una determinada longitud de onda. Este valor de es independiente de la concentración C de la...