Bioquimica Sangre

OBJETIVO:
Conocer los límites normales de la concentración sanguínea de hemoglobina en hombre como en mujer.

INTRODUCCION
La hemoglobina es la proteína principal de los eritrocitos que funciona como acarreadora de oxigeno desde los pulmones hasta los tejidos metabólicamente activos. Mientras que en musculo esquelético una proteína análoga, la mioglobina, actúa como almacenador del oxígenoabsorbido de la sangre y lo libera cuando se necesita.




MATERIAL UTILIZADO
Tubos de ensayo
Pipetas serológicas de 1/10 mL y 10 mL
Espectrofotómetro
Solución Estándar de Hemoglobina

Solución del Reactivo de Drabkin
Agua destilada
Gradilla
Muestra: sangre total

PROCEDIMIENTO

1. Tomar 3mL de sangre de un alumno y colocarla en un tubo con anticoagulante, siguientemente se le da vuelta de campana.
2.Deposite 5.0 mL de reactivo de Drabkin en cada uno de los tubos marcados como muestra, blanco y estándar.
3. Usando la pipeta serológica de 1/10 mL, añadir con cuidado 0.02 mL de sangre total al tubo marcado como muestra. Enjuagar la pipeta con la que se agrego la muestra con el reactivo varias veces. Mezcle bien por inversión y deje reposar por 10 minutos.
4. En el tubo estándar adicionar 0.02 mLde la solución estándar a una concentración de 20 g/Dl. Mezcla bien por inversión y deje reposar por 10 minutos.
5. Transferir aproximadamente 3mL de cada dilución preparada (1:251) a la celdilla correspondiente para realizar las lecturas de absorbancia.
6. Ajustar el espectrofotómetro a 0 de absorbancia utilizando el blanco de reactivo a 540 nm de longitud de onda.
7. Proceda a leer lasabsorbancias tanto de la muestra como del estándar.

Valores normales
• Hombre: 13.0 – 18.0 gr/dl de Hb
• Mujer: 12.0 – 16.0 gr/dl de Hb


CALCULOS
ABS. Hb PAC

(STD) =____ gr/dl de Hb
ABS. STD

Ejemplo 1
0.147

x 15 = 13.96 gr / dl de Hb
0.158


Ej.2
0.122

x 15 = 11.58 gr / dl de Hb
0.158


Ej.3
0.150

x 15 = 14.24 gr / dl de Hb
0.158



CUESTIONARIO
Describir los pasos en la biosíntesis del grupo hemy las consecuencias bioquímicas de una deficiencia parcial de cada una de las enzimas que participan en la biosíntesis el oxigeno
Existen dos diferentes rutas para sintetizar al precursor ä- aminolevulinato a partir del cual se obtiene el grupo hemo después de siete reacciones en común. La regulación de esta vía biosintética es al parecer a través del grupo hemo, el cual tiene un efectoinhibitorio en ambas vías mediante diferentes mecanismos.

El primer paso de la vía es la síntesis de ä-aminolevulinato, para lo cual se han encontrado dos diferentes rutas
- VIA C4 Esta vía se encuentra en levaduras, células de mamíferos y algunas proteobacteria. En esta vía, ä-ALA se sintetiza por la condensación de succinil-CoA y glicina en una reacción catalizada por la ALA sintetasa, la cual requierepiridoxal 5'-fosfato como cofactor esencial. La reacción ocurre en dos pasos: la condensación de los sustratos para formar el complejo intermediario enzima-á-aminoâ cetoadipato y su descarboxilación para formar ä-ALA.
-VIA C5 El ä-ALA también puede sintetizarse a partir del esqueleto C5 del glutamato. Esto sucede en cloroplastos de plantas y algas verdes, además de arqueas, cianobacterias y enalgunas eubacterias. Esta ruta se inicia con el glutamil-tRNA, el cual se reduce a glutamato-1-semialdehído por la glutamil-tRNA reductasa.
Después de la formación de ä- ALA, las rutas C4 y C5 comparten las siguientes siete reacciones para la síntesis final del grupo hemo. Las enzimas involucradas y la naturaleza de los intermediarios se encuentran muy conservadas en todos los organismos. EnBradyrhizobium japonicum se analizó una mutante deficiente en la ALA-S y se demostró que esta enzima no es necesaria para la síntesis del hemo en los nódulos formados por esta bacteria. Estos resultados sugieren que la siguiente enzima en la vía, la ALA-D, es realmente la primera enzima esencial en la síntesis de hemos en esta bacteria y no la ALA-S. El transporte de ä-ALA hacia el citosol en la vía...