Bioquimica Taller
Páginas: 5 (1129 palabras)
Publicado: 1 de mayo de 2015
1) (falta grafico)
se utiliza para detectar interacciones entre proteínas y ha sido especialmente útil para estudios a gran escala ya que permite analizar grandes conjuntos de proteínas en un único experimento global.
La técnica consiste en la activación de un gen reportero o más por la acción de un factor de transcripción sobre la secuencia regulatoria "UAS" (en inglés, Upstream activatingsequence) localizada upstream del promotor.
El principio de la técnica es el siguiente, el factor de transcripción es separado en dos fragmentos, uno que reconoce UAS y el otro que promueve la activación de la maquinaria de transcripción. Cada fragmento es fusionado a una de las proteínas cuya interacción se desea analizar, usando técnicas de ingeniería genética. Si las proteínas forman un complejoentre sí, los dos fragmentos del factor de transcripción se encontrarán y el gen reportero será transcrito..
La técnica del doble híbrido.
El objetivo de la técnica es el de encontrar las proteínas Y capaces de unirse a la proteína X.
El modelo.
El sistema del doble híbrido permite de identificar una interacción proteína-proteína (X-Y) en vivo mediante la reconstitución de un activador de laactividad transcripcional (N-C).
La debilidad de esta técnica es que puede dar muchos falsos positivos sobre todo en los ensayos a gran escala ya que se expresan juntas y a la vez proteínas que en condiciones fiosiologicas no tienen por qué coincidir nunca en el espacio (pueden expresarse en compartimentos o tipos celulares distintos) ni en el tiempo (su regulación puede hacer que nunca seexpresen a la vez).
2) A.) Cómo se determina el espectro de absorción de una solución colorida?
El espectro de absorción es una representación gráfica que indica cantidad de luz absorbida (E) a diferentes valores de (ALFA) .A partir de una solución diluida de un compuesto, cuya absorbancia máxima entra dentro del rango de medida del espectrofotómetro, se verá el valor de absorbancia a diferenteslongitudes de onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la solución de la muestra a caracterizar. A partir del espectro de absorción se obtendrá el valor de A(ALFA) al que el compuesto presenta la mayor absorbancia (ALFA MAX)
Dicho (ALFA) se utilizará a la hora de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto. El espectro de absorción de un cromóforo depende,fundamentalmente, de la estructura química de la molécula.
B) ¿Cómo se selecciona la longitud de onda apropiada en un espectro para la aplicación en la determinación de concentraciones por espectrofotometría?
La absorción de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia química. Cuando la luz atraviesa unasustancia, parte de la energía es absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.
C) ¿Qué establece la ley de Lambert-Beer-Bourger?La ley de Beer-Lambert relacionala intensidad de luz entrante en un medio con la intensidad saliente después de que en dicho medio se produzca absorción. La relación entre ambas intensidades puede expresarse a través la siguiente relación: VA LA FORMULA FOTO
ley explica que hay una relación exponencial entre la transmisión de luz a través de una sustancia y la concentración de la sustancia, así como también entre la transmisión y lalongitud del cuerpo que la luz atraviesa. Si conocemos l y , la concentración de la sustancia puede ser deducida a partir de la cantidad de luz transmitida. Las unidades de c y dependen del modo en que se exprese la concentración de la sustancia absorbente. Si la sustancia es líquida, se suele expresar como una fracción molar. Las unidades de son la inversa de la longitud (por ejemplo cm1)....
se utiliza para detectar interacciones entre proteínas y ha sido especialmente útil para estudios a gran escala ya que permite analizar grandes conjuntos de proteínas en un único experimento global.
La técnica consiste en la activación de un gen reportero o más por la acción de un factor de transcripción sobre la secuencia regulatoria "UAS" (en inglés, Upstream activatingsequence) localizada upstream del promotor.
El principio de la técnica es el siguiente, el factor de transcripción es separado en dos fragmentos, uno que reconoce UAS y el otro que promueve la activación de la maquinaria de transcripción. Cada fragmento es fusionado a una de las proteínas cuya interacción se desea analizar, usando técnicas de ingeniería genética. Si las proteínas forman un complejoentre sí, los dos fragmentos del factor de transcripción se encontrarán y el gen reportero será transcrito..
La técnica del doble híbrido.
El objetivo de la técnica es el de encontrar las proteínas Y capaces de unirse a la proteína X.
El modelo.
El sistema del doble híbrido permite de identificar una interacción proteína-proteína (X-Y) en vivo mediante la reconstitución de un activador de laactividad transcripcional (N-C).
La debilidad de esta técnica es que puede dar muchos falsos positivos sobre todo en los ensayos a gran escala ya que se expresan juntas y a la vez proteínas que en condiciones fiosiologicas no tienen por qué coincidir nunca en el espacio (pueden expresarse en compartimentos o tipos celulares distintos) ni en el tiempo (su regulación puede hacer que nunca seexpresen a la vez).
2) A.) Cómo se determina el espectro de absorción de una solución colorida?
El espectro de absorción es una representación gráfica que indica cantidad de luz absorbida (E) a diferentes valores de (ALFA) .A partir de una solución diluida de un compuesto, cuya absorbancia máxima entra dentro del rango de medida del espectrofotómetro, se verá el valor de absorbancia a diferenteslongitudes de onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la solución de la muestra a caracterizar. A partir del espectro de absorción se obtendrá el valor de A(ALFA) al que el compuesto presenta la mayor absorbancia (ALFA MAX)
Dicho (ALFA) se utilizará a la hora de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto. El espectro de absorción de un cromóforo depende,fundamentalmente, de la estructura química de la molécula.
B) ¿Cómo se selecciona la longitud de onda apropiada en un espectro para la aplicación en la determinación de concentraciones por espectrofotometría?
La absorción de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia química. Cuando la luz atraviesa unasustancia, parte de la energía es absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.
C) ¿Qué establece la ley de Lambert-Beer-Bourger?La ley de Beer-Lambert relacionala intensidad de luz entrante en un medio con la intensidad saliente después de que en dicho medio se produzca absorción. La relación entre ambas intensidades puede expresarse a través la siguiente relación: VA LA FORMULA FOTO
ley explica que hay una relación exponencial entre la transmisión de luz a través de una sustancia y la concentración de la sustancia, así como también entre la transmisión y lalongitud del cuerpo que la luz atraviesa. Si conocemos l y , la concentración de la sustancia puede ser deducida a partir de la cantidad de luz transmitida. Las unidades de c y dependen del modo en que se exprese la concentración de la sustancia absorbente. Si la sustancia es líquida, se suele expresar como una fracción molar. Las unidades de son la inversa de la longitud (por ejemplo cm1)....
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