Bioquimica P

INTRODUCCION Y ANTECEDENTES


La investigación de los lípidos tuvo un avance muy grande, cuando se comenzaron a utilizar los diversos procedimientos cromatográficos, que hicieron pasible el aislamiento y separación de los componentes lipídicos a partir de materiales biológicos. Para separar grupos de lípidos, como triacilgliceroles, ácidos grasos, colesterol, esteres del colesterol, fosfátidosentre otros, se ha observado con éxito la cromatografía en columna con absorbentes como la alúmina, carbón y ácido salisico. Los geles de ácido silisico han sido muy útiles en la separación de estos. La cromatografía es una técnica que se utiliza para separar e identificar los Componentes de una mezcla. Se basa en el reparto de cada compuesto entre una fase móvil y una fase estacionaria. El repartose produce sobre la fase estacionaria, que tiende a retener el compuesto por adsorción. La fase móvil discurre a través de la fase estacionaria y tiende a arrastrarlo (desorción). Los componentes de la mezcla se separan porque responden de forma distinta a las fuerzas de adsorción/desorción. En la TLC la fase estacionaria es silicagel y la fase móvil una mezcla de disolventes (eluyente). Eleluyente se selecciona de acuerdo con los lípidos que se desean separar: los lípidos neutros se separan con eluyentes apolares y los lípidos cargados con eluyentes polares. Cada lípido migra a una distancia característica en función de su polaridad que le hace identificable al compararlo con patrones.



OBJETIVOS

Realizar cromatografía en capa fina para la separación de lípidos y su identificación.DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

1. Coloque dos portaobjetos, uno contra otro. Agite la sílica gel, para hacer una suspensión homogénea. Inmediatamente, sosteniendo los portaobjetos por uno de sus extremos, sumérjalos en la sílica, lo más posible, sin que la sílica llegue a tocar los que los sostienen.
2. Sostenga los portaobjetos sumergidos en la sílica por dos o tres segundos. Sáquelos y deje queescurra el exceso de sílica, sobre el mismo frasco.
3. Inmediatamente separe los portaobjetos y, con mucho cuidado, elimine el exceso de sílica que haya quedado en los cantos, recorriéndolos con un dedo, procurando que no se destruya la sílica que quedo en la superficie. Esto debe hacerse cuando la sílica todavía este fresca, de lo contrario se maltratara la superficie.
4. Deje sin mover losportaobjetos unos diez minutos, para que sequen bien.
5. Prepare, de la misma, manera otro par de objetos.
6. Pipetee 5 ml de cloroformo a un tubo de ensaye y disuelva en él, más o menos un gramo de lecitina, de la obtenida en una de las practicas anteriores o de la que le proporcione si instructor.
7. Vacié a cada uno de los dos vasos de precipitado un poco de la mezcla de éter de petróleo-éteretílico-ácido acético hasta una altura de unos cuatro milímetros. Tape los vasos, lo mejor posible, con el papel de aluminio.
8. En uno de los portaobjetos se pondrá la muestra de lecitina, y en los otros tres pondrán muestras de los lípidos de referencia proporcionados por el instructor.
9. Se pondrá en cada portaobjetos una pequeña gota de las muestras, tomada con un capilar, en el centro y unadistancia de centímetro y medio del extremo de la sílica. Use distinto tubo capilar para cada muestra. Anote que muestras puso en sus portaobjetos, para poder reportarlos.
10. Coloque, con mucho cuidado, dos portaobjetos en cada vaso de precipitados, preparados ya con los solventes, recargándolos en la pared del vaso, sin agitar la muestra y sin que queden muy inclinados.
11. Observe el ascenso de lossolventes. No se descuide, pues el ascenso es muy rápido. Faltando aproximadamente medio centímetro para que el solvente llegue al extremo superior de los portaobjetos, sáquelos del solvente. Hágales una pequeña señal en el punto donde llego el solvente, y déjelos secar al aire.
12. Lleve los portaobjetos a la estufa a 100 ̊C y déjelos el tiempo necesario para que aparezcan las manchas oscuras,...