Bioquimica

GLUCOSA POR MÉTODO ENZIMATICO

La glucosa es oxidada enzimáticamente por la glucosa oxidasa a acido glucónico y H2O2. El H2O2 presencia de peroxidada produce la copulación oxidativa del fenol conla 4-aminofenazol dando lugar a la formación de un cromógeno ROJO-CEREZA con absorbancia máxima a 505nm.
La sensibilidad del método es 0.018-0.18 μmoles, siendo el testigo una solución de glucosa1mg/ml.

GLUCOSA POR MÉTODO ENZIMATICO(protocolo)

 
Blanco 1
Blanco 2
Testigo 1
Testigo 1'
Muestra 1
Muestra 1'
H2O(ml)
0,02
0,02
-
-
-
 
Testigo(ml)
-
-
0,02
0,02-
-
Muestra (ml) -
-
-
-
-
0,02
0,02
Reactivo(ml)
1,00
1,00
1,00
1,00
1,00
1,00


MÉTODO ENZIMATICO
TUBO
ABS.
Blanco Prom.
0,0195
Testigo Prom.
1,0990Muestra Prom.
0,5210


CÁLCULO DE CONCENTRACIÓN DE MUESTRA:

Abstestigo = E.b.Ctestigo
Absmuestra = E.b.Cmuestra

Absmuestra .Ctestigo /Abstestigo = Cmuestra
0.521 x 1g/l / 1.099=0.4740g/l

1 mol Glucosa ------------------ 162 g glucosa
2,92 x 10-3 mol glu. = X -------- 0,4740 g glucosa

2920 μMolar glucosa=X






MÉTODO DE BRADFORD:

El coloranteAZUL BRILLANTE DE COOMASSIE sufre un cambio en su absorbancia a 595 nm cuando se une a proteínas. El aumento de absorbancia a 595nm respecto al blanco de reactivos es proporcional a la cantidad deproteínas. La sensibilidad del método es 3-30 μg de albúmina, siendo el testigo una solución de albúmina 0.5mg/ml.


CÁLCULOS:

Sensibilidad del método 3-30 μg por lo que:

0.5 μgalbúmina----------------1 μlitros
3 μg ----------------------------x = 6 μlitros = 6.10-3 ml
30 μg---------------------------X= 60 μlitros = 0.06 ml




Por lo que el limite inferior de concentración en elgrafico va a ser de 6.10-3 ml y el limite superior 0.06 ml.


































Según la grafica pudimos obtener la ecuación de la recta:

y =...