bioquimica

PRACTICA DE LABORATORIO N°5
DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO DE PROTEINAS
OBJETIVO:
Determinar el punto isoeléctrico de las proteínas
FUNDAMENTO:
Por sus propiedades químicas Las proteínas son sustancias anfoteras pues son moléculas que contienen los grupos carboxilos y amino libres.
Las proteínas acidas se deben a lo grupos carboxilo extremo y a aminoácidos dicarboxilico. Loshidróxidos fenólicos de latirosina y grupos tiolicos de los aminoácidos que contienen azufre ayudan a crear el medio acido.
Las proteínas deben sus propiedades básicas a los grupos aminos, imino, guanidino de los aminoácidos básicos, asi también el grupo amino del aminoácido extremo de la proteína.
El Ph de la disolución proteica al cual la carga de la proteína se hace igual a cero corresponde a su puntoisoeléctrico, en este punto la proteína pierde su estabilidad, tendiendo a precipitar.
En la mayoría de las proteínas el punto isoeléctrico se situa cerca del medio neutro aunque se puede desplazar ligeramente hacia el lado acido. Un pequeño numero de proteínas contiene mas grupos aminos, por ejemplo las proteínas las histonas, por lo que su P.I. corresponde a un campo débilmente alcalino.MATERIALES Y REACTIVOS:
Vasos precipitados
Pipetas
Tubo de ensayo
Sol. De proteína al 1% albumina
Alcohol etílico al 96%
Acetato de sodio 0.1N
Acido acético 0.1N
PROCEDIMIENTO:
1.- Preparar una serie de disoluciones amortiguadoras y agregar la disolución proteica de acuerdo al siguiente cuadro:
DISOLUCION ml
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
Tubo 6
Acetato de sodio 0,1N
2
2
2
22
2
Acido acético 1N
0.25
0.5
1
2
4
-
Acetato de sodio 0.1N
-
-
-
-
-
0.8
Agua distilada
3.75
3.5
3
2
-
3.2
Proteína al 1%
2
2
2
2
2
2
2.- homogenizar los tubos de ensayo y añadir lentamente 2 – 3 ml de alcohol etílico al 96%, a todos los tubos agitando permanentemente, hasta observar una turbides apenas perceptible.
3.- dejar en reposo aprox. 20 min. Para observarmejor el enturbamiento
4.- medir el ph de cada tubo, considerar aquel tubo que presenta mayor grado de turbides, como el ph correspondiente al punto isoeléctrico.
CALCULOS:
Ph de los diferentes soluciones:
tubos
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
Tubo 6
Ph
5,03
4,73
4,27
4,07
3,11
5,27
turbidez
++
+
+
++
+++
++

CUESTIONARIO:
1.- indicar el grado de turbidez de cadatubo. Débil (+), mediana (++), fuerte (+++)

tubos
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
Tubo 6
turbidez
++
+
+
++
+++
++

2.- cual es el punto isoeléctrico determinado experimentalmente para la proteína problema
Es un componente importante en la producción de muchas drogas terapéuticas y pruebas diagnósticas. Muy soluble en agua y su punto isoeléctrico es de 4,78.
3.- porque seutilizas alcohol etílico en la determinación del punto isoeléctrico
Cualquier factor que modifique la interacción de la proteína con el disolvente disminuirá su estabilidad en disolución y provocará la precipitación. Así, la desaparición total o parcial de la envoltura acuosa.

4.- que ocurriría si la proteína se encuentra con solución catiónica o anionica
La neutralización de las cargaseléctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrógeno facilitarán la agregación intermolecular y provocará la precipitación. La precipitación suele ser consecuencia del fenómeno llamado desnaturalización.

5.- que explicación daría usted al siguiente experimento en el desempeño de su profesión
Eliminación de materia orgánica: Eliminación de ácidos orgánicos (ejemplos: ácidos húmicos otaninos) precursores de trihalometanos al clorar el agua. Se emplean generalmente resinas aniónicas en forma de cloruro, especialmente de tipo acrílico.
Eliminación de nitratos: Eliminación de aniones nitrato NO3-, mediante resinas en forma de cloruro.
Eliminación del ion amonio: Eliminación de NH4+ por medio de resinas catiónicas.
Desionización del agua: Reducción de los cationes (Ca2+, Na+,...