Bioquimica

PRACTICA N° 09
PROPIEDADES CATALITICAS DE LA CATALASA
1. OBJETIVOS
• Comparar la velocidad de una misma reacción sin catalizador, con catalizador inorgánico y con catalizador orgánico (enzima).
• Comparar las propiedades catalíticas de una enzima con las de un catalizador inorgánico.
• Demostrar que las enzimas son catalizadores biológicos.
• Dar a conocer un método de determinación deactividad enzimática.
• Determinar la eficiencia de la enzima como catalizador.
5. RESULTADOS
RESULTADO DEL GASTO DE VOLUMEN: DESCOMPOSICIÓN DEL H2O2

Experimento Volumen
Sin catalizador 5.4 mL
Con catalizador inorgánico (sulfato ferroso 5%) 8.2 mL
Con catalizador orgánico (catalasa) 50.3 mL
CALCULOS:
a) Cálculo del número de moles de oxígeno liberado según la siguiente fórmula:donde:
P = presión atmosférica = 736.6 mmHg
V = Volumen desplazado por el oxígeno ) en litros)
R= Constante general que equivale a 62.4 mmHg/L/mol °K
T= temperatura absoluta °K = 20 °C = 293 °K
n = n° de moles de O2 liberado / min.
• Sin catalizador:

• Con catalizador inorgánico:

• Con catalizador orgánico:


b) Cálculo de la actividad enzimática en unidades de catalasa:Catalasa = moles de catalizador orgánico = 2026.5 unidades de catalasa

c) Cálculo de la eficiencia de la catalasa con respecto al catalizador inorgánico:


6. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
• De los resultados se puede apreciar que la reacción con catalasa presenta 2026.5 moles de oxígeno liberado, a excepción de las otras dos reacciones que presenta menor número de moles de O2 liberado, esdecir, 330.3 moles en el caso del sulfato ferroso y 217.5moles en la reacción sin catalizador.
• La actividad realizada con el catalizador orgánico (catalasa) presenta una mayor rapidez, es decir, hay mayor actividad y por lo tanto la reacción se acelera.
• Con esto se puede concluir que cuando ocurre una mayor disminución en el volumen de oxígeno, habrá mayor actividad (debido al mayordesdoblamiento de agua oxigenada).
• La eficiencia del catalizador orgánico (catalasa) con respecto al catalizador inorgánico (sulfato ferroso) es de 6.135. Esto nos permite ver la mejor efectividad de la catalasa en los organismos vivos.
• Se debe tener cuidado al medir el volumen de peróxido, cerrando primero la llave para impedir la salida del agua oxigenada. Se debe agitar suavemente el matraz paravoltear el vial y en este instante empezar a tomar el tiempo, que debe ser exacto.
7. CUESTIONARIO
1. ¿Cuál de las tres reacciones es más efectiva y por qué?
La reacción más efectiva es la tercera reacción, donde se descompone el H2O2 liberando O2 por acción de la catalasa, que es una enzima que se encuentra en la sangre, en el hígado y riñón.
La tercera reacción es la más efectiva porque lacantidad de oxígeno liberado por minuto es mucho mayor que en las otras dos reacciones, que fueron tratadas bajo las mismas condiciones de temperatura, presión atmosférica, etc.
La velocidad de la reacción es mayor, lo que demuestra la eficiencia de la enzima.

2. Exprese los resultados obtenidos en sangre en términos de unidades de catalasa.

El volumen de oxígeno liberado fue de 23 mL /min = 0.023L O2 /min


3. ¿Sería importante el uso de algún buffer adicional en esta práctica?
El pH del ensayo es importante al medir la actividad enzimática, éste pH debe ser estable y para ello se debe utilizar un buffer con un pKa cercano o igual al pH óptimo del ensayo.
Pero la determinación de la actividad enzimática de la catalasa en la sangre no se utilizó un buffer, porque en lasangre ya existe un buffer fosfato que impide los cambios bruscos de este pH.

4. ¿Por qué o con qué objetivo mediría la actividad enzimática de la catalasa? (escoja una muestra específica por ejemplo sangre, frutas, etc.). Explique.
En la industria del pescado, es necesario determinar la actividad enzimática de la catalasa, ya que es un indicador de la frescura del pescado en las branquias. Si...