bioquimica

Cromatografía de exclusión molecular para la separación de proteínas


La cromatografía es una técnica que permite la separación de
Moléculas diferentes presentes en una misma muestra. El métodoestá
Basado en la circulación de una fase móvil (que arrastra a la mezcla de
Compuestos a separar), a través de una fase estacionaria. Dependiendo de la
Afinidad relativa que por ambas fasestengan los distintos compuestos
Presentes en la mezcla resultará su separación.
La cromatografía de exclusión molecular (a menudo también llamada
Filtración en gel o de tamiz molecular) es una de lastécnicas más sencillas
De las empleadas en la separación de proteínas y ácidos nucleicos.


Esta técnica, separa moléculas por tamaño. Las moléculas de mayor tamaño pasan mas rápidamente que las demenor tamaño a diferencia de otras formas de cromatografía, no hay una interacción atractiva entre la fase estacionaria y el soluto en el caso ideal de una exclusión molecular. En su lugar la fasemóvil liquida o gaseoso pasa a través del gel poroso, los poros son bastante pequeños para excluir a los solutos grandes, pero no a los pequeños. L as moléculas grandes pasan de largo sin entrar en losporos. Las moléculas pequeñas tardan más tiempo en pasar a través de la columna, por que penetran dentro del gel, y por consiguiente deben atravesar más volumen antes de abandonar la columna.
Este tipode cromatografía se realiza en columnas cilíndricas rellenas con algunos de los geles que se fabrican con este fin y que pueden ser de varios tipos: dextranos con enlaces cruzados (sephadex), agarosa(sepharose, Bio-gel A), poliacrilamida (Bio-gel B), etc.
Todos estos geles (fase estacionaria) se hallan constituidos por gránulos (particulas) de un material esponjoso hidratado, que contieneporos con un tamaño de diámetro determinado.














Mecanismo de la cromatografía de exclusión



Las mallas del gel permiten la entrada selectiva de las partículas de menor...