Bioquimica

PROTEÍNA TOTAL

I. INTRODUCCIÓN

Las proteínas como un grupo de biomoleculas, desempeñan una gran variedad de funciones, algunas participan en la contracción muscular y sirven para dar soporte estructural, otras trasportan y almacenan moléculas pequeñas. Los anticuerpos (moléculas que sirven para como protección inmunológica) son proteínas al igual que las enzimas (catalizadoresbiológicos) y algunas hormonas. Las proteínas pueden llevar a cavo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de combinaciones en la composición y secuencia de aminoácidos.
Las proteínas totales resultan útiles para realizar el seguimiento de los cambios totales de los niveles de proteínas causados por diversos estados de enfermedad. Generalmente se realiza junto con otras pruebas tales comola seroalbúmina, las pruebas de la función hepática o la electroforesis de proteínas. Con frecuencia se calcula una proporción de albúmina/globulina a fi n de obtener información adicional.
Se encuentran un aumento de los niveles durante la deshidratación, el mieloma múltiple y las enfermedades hepáticas crónicas, mientras que un descenso de niveles es propio de la enfermedad renal y delfallo hepático terminal.

II. METODO DE BIURET:.

La reacción de biuret recibe este nombre porque el compuesto orgánico biuret, en presencia de y a pH alcalino forma un complejo coloreado azul-violeta.
Biuret es un compuesto que tiene estructura similar al enlace peptídico presente en proteínas, por ello cuando éstas son mezclas con iones Cu++ y a pH alcalino forma un complejo coloreadoazul-violeta.
La reacción ocurre cuando el compuesto contiene en su estructura dos o mas de los siguientes grupos:
CONH2, CH2NH2, CSNH2, CNH2NH2

Una proteína debe contener un mínimo de tres enlaces peptidicos para originar una reacción de color, esta es proporcional al número de en laces peptidicos presentes y por ello, proporcional a la cantidad de proteína presente enla muestra.

III. OBJETIVOS



➢ Demostrar el manejo adecuado de la técnica para la determinación de proteínas en una muestra biológica.

➢ Establecer los valores de referencia de proteínas y comparar con el valor de nuestra muestra problema a analizar.

➢ Definir cuáles son las principales patologías que se presentan si tenemos valores altos o bajos de proteínas.IV. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

Los grupos -CO-NH- unidos entre sí dan una reacción con formación de color violeta con las sales cúpricas en medio alcalino, siendo la más representativa y simple la que da con el Biuret -NH2-CO-NH-CO-NH2. Es en la actualidad el método colorimétrico más exacto y simple para la determinación de proteínas totales.

V. MATERIALES:❖ 1 Micropipeta de 50 µL.

❖ 1 Piseta con agua destilada

❖ 3 Celdas de 5cm3

❖ Tubos de vidrio

❖ Puntas para Micropipeta

❖ Gradilla.

EQUIPO

❖ Espectrofotómetro

❖ centrifuga

MUESTRA CLINICA:

❖ Suero sanguíneo

REACTIVOS:


Reactivo de BiuretEstándar albúmina 8g/dl:

VI. PROCEDIMIENTO

Colocar en un tubo la muestra de sangre obtenida centrifugar a 300RPM






















VII. PROCEDER DE ACUERDO AL SIGUIENTE ESQUEMA:



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|Agregar 5ml de: | |
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|REACTIVO 1 : BIURET |...